Diferença entre a página SDS e a página nativa

Diferença de chave - Página SDS x nativa Página
 

SDS e página nativa são dois tipos de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida usadas em Biologia Molecular. o diferença chave entre SDS Page e Native Page é o tipo de gel de poliacrilamida usado. Na página SDS, é utilizado um gel desnaturante, portanto, as moléculas são separadas com base no seu peso molecular. Por outro lado, na Página Nativa, géis não desnaturantes são usados. Portanto, as moléculas são separadas com base em seu tamanho, carga e forma.

A Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (Página) usa um gel produzido pela polimerização de monômeros de acrilamida com metileno bisacrilamida. A poliacrilamida é mais resistente e mais estável ao calor que a agarose. Os géis de poliacrilamida têm um tamanho de poro menor que permite a separação eficiente de proteínas. Existem dois tipos principais de configurações de página, a página SDS e a página nativa. Página SDS ou Eletroforese em gel de poliacrilamida de sódio-dodecil sulfato separa as proteínas com base em seus pesos moleculares. Géis desnaturantes são usados ​​na página SDS. Página nativa usa géis não desnaturantes e separa proteínas com base em seu tamanho, carga e forma (conformação 3D).

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é a página SDS
3. O que é Página Nativa
4. Semelhanças entre a página SDS e a página nativa
5. Comparação lado a lado - página SDS versus página nativa em forma de tabela
6. Resumo

O que é a página SDS?

SDS Page é a técnica eletroforética mais comum usada para separar proteínas com base em seu peso molecular. O gel é produzido pela adição de SDS (dodecilsulfato de sódio), que é um detergente. A SDS dentina proteínas em monômeros. SDS é um detergente aniônico. Portanto, adiciona uma carga líquida negativa às proteínas dentro de uma ampla faixa de pH. Quando a carga negativa líquida é transmitida às moléculas de proteína, devido à variação da carga, as estruturas complexas são quebradas. Devido à carga negativa, as proteínas se atraem para o fim positivo. Assim, moléculas com menor peso molecular viajam mais rapidamente na matriz de gel e podem ser observadas próximas ao ânodo, enquanto as proteínas de maior peso molecular são observadas mais próximas dos poços.

Figura 01: Página SDS

A ligação do SDS à cadeia polipeptídica é proporcional à sua massa molecular relativa. Portanto, a massa molecular também pode ser determinada via SDS Page. A coloração dos géis de SDS Page é feita por coloração com azul de bromofenol. As aplicações da página SDS variam em maior medida, onde podem ser usadas para estimar a massa molecular relativa e determinar a abundância relativa de proteínas em uma mistura de proteínas. A página SDS também pode ser usada para determinar a distribuição de proteínas em uma mistura de proteínas. A página SDS também é aplicada para purificar e avaliar proteínas. É usado como procedimento preliminar para transferência e hibridação de Western, que por sua vez são usadas para mapeamento e identificação de proteínas.

O que é Página Nativa?

A eletroforese em gel de poliacrilamida nativa (página nativa) utiliza um gel não desnaturante. Portanto, SDS ou qualquer outro agente desnaturante não é adicionado à matriz de gel. Na Página Nativa, a separação de proteínas é baseada na carga e no tamanho da proteína. Portanto, a mobilidade da proteína depende da carga e do tamanho da proteína.

A carga da proteína depende das cadeias laterais dos aminoácidos. Se as cadeias laterais estiverem carregadas negativamente, a proteína receberá uma carga negativa geral e vice-versa. As proteínas retêm uma conformação 3D devido à dobra que ocorre. A dobragem resulta de vários tipos de ligação em proteínas, como ligações dissulfeto, interações hidrofóbicas e ligações de hidrogênio. Portanto, se a página nativa for transportada em pH neutro, as proteínas serão separadas de acordo com a forma molecular da proteína. Portanto, o Native Page pode ser usado como uma técnica sensível para detectar a mudança de carga ou conformação da proteína.

A principal vantagem da página nativa é que a proteína usada para a análise da página pode ser recuperada em seu estado original após a análise da página, pois a proteína não é perturbada durante o processo. Página nativa é uma técnica de rendimento relativamente alto e a estabilidade da proteína é aumentada.

Figura 02: Página nativa

Após a conclusão da corrida do gel, o gel Native Page pode ser visualizado por coloração com azul de bromofenol ou qualquer outro reagente de coloração adequado. As aplicações do Native Page incluem a separação de proteínas ácidas, incluindo glicoproteínas, como a eritropoietina recombinante humana, ou a identificação de proteínas presentes na albumina de soro bovino (BSA).

Quais são as semelhanças entre a página SDS e a página nativa?

• Os sistemas SDS Page e Native Page usam gel de poliacrilamida como matriz do gel.
• Ambos são usados ​​para separação e identificação de proteínas.
• Ambos usam mobilidade eletroforética para separar os compostos.
• Ambos podem ser feitos de maneira vertical ou horizontal (principalmente feitos como configurações verticais da página, porque o comprimento da execução é maior).
• O aparelho de eletroforese, incluindo o tanque de gel, pentes, a fonte de alimentação é necessário para a operação de ambas as técnicas.
• A visualização do gel pode ser feita por métodos de coloração nas duas técnicas.

Qual é a diferença entre a página SDS e a página nativa?

Página SDS x Página Nativa
A página SDS ou a página sulfato de sódio-dodecil separa as proteínas com base em seu peso molecular e utiliza um gel desnaturante.	Página nativa usa géis não desnaturantes e separa proteínas com base em seu tamanho, carga e forma (conformação 3D).
Tipo de Gel
Um gel desnaturante é usado na página SDS.	Um gel não desnaturante é usado na página nativa.
Presença de SDS
SDS está presente como detergente para transmitir uma carga negativa na amostra na página SDS.	SDS não está presente na página nativa.
Base de separação
A separação de proteínas depende do peso molecular da proteína na página SDS.	A separação depende do tamanho e forma da molécula de proteína na página nativa.
Estabilidade da proteína
A estabilidade da proteína é baixa na página SDS.	A estabilidade da proteína é alta na página nativa.
Recuperação da proteína original
Não é possível, pois está desnaturado na página SDS.	Possível na página nativa.

Sumário - Página SDS x Nativo Página

SDS Page e Native Page são dois tipos de técnicas de eletroforese em gel de poliacrilamida usadas para separar proteínas. A página SDS é tratada com um detergente chamado SDS. A SDS transmite uma carga negativa geral à proteína, o que resulta na desnaturação da proteína. Portanto, as proteínas são separadas com base no seu peso molecular. Por outro lado, a técnica Native Page não usa nenhum agente desnaturante. Assim, as proteínas são separadas com base no tamanho ou na forma. Essa é a diferença entre a página SDS e a página nativa.

Referência:

1. "O princípio e método da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE)". O princípio e método da eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Disponivel aqui
2. "Géis nativos". Laboratórios de proteínas da Alliance | Serviços de caracterização biofísica. Disponivel aqui  

Cortesia da imagem:

1. Eletroforese'SDS-PAGE: por Bensacount na Wikipedia em inglês (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. Carregar uma amostra em um poço de eletroforese em gel de poliacrilamida; por Blaz Nemec de Ljubljana, Eslovênia (CC BY-SA 2.0) via Commons Wikimedia