Diferença entre a página SDS e o Western Blot

Diferença de chave - página SDS x Western Blot
 

Western blotting é uma técnica que detecta uma proteína específica de uma amostra de proteína. Essa técnica é realizada através de várias etapas principais: eletroforese em gel, transferência e hibridação. Eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (Página SDS) é um tipo de técnica de eletroforese em gel usada para separar proteínas de acordo com seus tamanhos (pesos moleculares). Western blot é uma folha especial de uma membrana que é usada para transferir o mesmo padrão das proteínas na página SDS. A principal diferença entre SDS Page e western blot é que SDS Page permite a separação de proteínas em uma mistura enquanto western blot permite a detecção e quantificação de uma proteína específica de uma mistura. Ambos são úteis em estudos de análise de proteínas.

CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é a página SDS
3. O que é Western Blot
4. Comparação Lado a Lado - Página SDS vs Western Blot
5. Resumo

O que é a página SDS?

SDS Page é uma técnica de eletroforese em gel usada para separação de proteínas. É comumente usado em bioquímica, genética, forense e biologia molecular. Depois que as proteínas são extraídas da amostra, elas são executadas em um gel composto de SDS e poliacrilamida. SDS é um detergente aniônico que é usado para linearizar proteínas (desnaturar proteínas) e transmitir uma carga negativa às proteínas linearizadas proporcionais à sua massa molecular. A poliacrilamida se torna o suporte sólido para o gel. As proteínas desnaturadas, carregadas negativamente, migram para a extremidade positiva do aparelho através do gel. De acordo com o tamanho das proteínas, as velocidades de migração diferem entre as proteínas e ocorre a separação. Portanto, a página SDS é útil para a separação de proteínas individuais com base em seus tamanhos.

A preparação do gel de poliacrilamida para o fracionamento de proteínas é uma etapa crucial na SDS Page. A concentração correta de poliacrilamida e o tipo de agente de reticulação usado afetam fortemente as propriedades físicas do gel, o que faz a separação real das diferentes proteínas. Os tamanhos dos poros do gel devem ser adequadamente gerenciados para uma separação eficaz. No entanto, a SDS Page é considerada uma técnica de separação de proteínas de alta resolução.

A técnica SDS Page tem uma grande limitação na análise de proteínas. Como a SDS desnatura proteínas antes da separação, ela não permite a detecção de atividade enzimática, interações de ligação de proteínas, cofatores de proteínas, etc..

Figura 01: Página SDS

O que é Western Blot?

A técnica de Western blotting permite a detecção de uma proteína específica a partir de uma mistura de proteínas e a medição da quantidade e peso molecular da proteína. Western blot é a membrana usada durante o procedimento de transferência para obter a imagem espelhada dos padrões de proteínas no gel de SDS-poliacrilamida. A membrana que é usada para a transferência ocidental é composta principalmente de nitrocelulose ou difluoreto de polivinilideno (PVDF). A membrana com a proteína transferida pode ser usada para identificar a proteína desejada. Requer anticorpo de alta qualidade para a detecção da proteína desejada por hibridação. O anticorpo se liga ao seu antígeno específico e revela a presença do antígeno desejado, que é uma proteína.

A transferência das proteínas do gel de poliacrilamida SDS para a transferência de Western é realizada por eletrotransferência. É um método eficaz e rápido que faz com que as proteínas se eletroforese do gel e passem para a membrana de nitrocelulose (western blot).

Figura 02: Western Blot

Qual é a diferença entre SDS Page e Western Blot?

Página SDS x Western Blot
SDS Page é uma técnica de eletroforese em gel.	Western blot é uma técnica realizada em uma membrana para detectar uma proteína específica de uma mistura.
Usar
A página SDS permite a separação de proteínas de acordo com seus tamanhos.	Western blot permite a transferência de proteínas no gel SDS page sem alterar seu padrão e permite a hibridação com anticorpos específicos.
Desvantagens
Desnaturação de proteínas, alto custo e presença de substâncias químicas neurotoxinas são as desvantagens dessa técnica.	Essa técnica é demorada e requer boas condições pessoais e controladas específicas.

Resumo - Página SDS x Western Blot

SDS page e western blot são dois métodos envolvidos na análise de proteínas. O SDS Page permite uma fácil separação de proteínas em um gel de acordo com seu peso molecular. O Western blot ajuda a confirmar a presença e a quantidade de uma proteína específica através da hibridação com anticorpos específicos. Essa é a diferença entre SDS Page e western blot.

Referências:
1. Blancher, C. e A. Jones. "SDS-PAGE e Western Blotting Techniques". Métodos em medicina molecular. U.S. National Library of Medicine, n.d. Rede. 27 de março de 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig e David H. Petering. "SDS-PAGE nativo: separação eletroforética de proteínas de alta resolução com retenção de propriedades nativas, incluindo íons metálicos ligados". Metalômica: ciência biometal integrada. Biblioteca Nacional de Medicina dos EUA, maio de 2014. Web. 27 de março de 2017.

Cortesia da imagem:
1. “Eletroforese em SDS-PAGE” Por Bensaccount na Wikipedia em inglês (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Western blot 114A" Por Amanthabagdon - Obra própria (Domínio Público) via Commons Wikimedia