Diferença entre PCR e PCR em tempo real

PCR vs PCR em tempo real

A reação em cadeia da PCR ou da polimerase é uma descoberta revolucionada na biologia molecular moderna, que foi desenvolvida pela primeira vez pelo químico Kary Mullis em 1983. Ela permite que uma única sequência de um DNA complexo seja amplificada para análise. A idéia básica da PCR é que dois iniciadores, que são complementares às cadeias opostas de uma sequência de DNA, são orientados um para o outro; os primers produzem fios complementares, cada um contendo o outro primer. Portanto, o resultado é uma grande quantidade de uma sequência correspondente ao DNA que fica entre os dois iniciadores. A enzima DNA polimerase é usada para estender os iniciadores na PCR. A polimerase de DNA é uma enzima termoestável e tem a capacidade de sobreviver em altas temperaturas (94 a 95 ° C) usadas para desnaturação do DNA modelo.

A PCR envolve três etapas, a saber, ciclos repetidos de desnaturação, recozimento de primers e síntese de DNA. Uma máquina termocicladora é usada para executar esta reação, de modo que possa ser programada para alterar as temperaturas com rapidez e precisão. As aplicações da PCR são investigações criminais, impressão digital de DNA, detecção de patógenos e análise de DNA de espécies humanas primitivas.

O que é PCR convencional?

Existem três estágios principais da PCR convencional, a saber; Estágio de amplificação de DNA, separação de PCR e detecção de produtos. A separação dos segmentos de DNA é tipicamente realizada por eletroforese em gel de agarose. Os produtos são então corados com brometo de etheiduim. Finalmente, a detecção é alcançada pela visualização de bandas nos géis sob luz UV. Portanto, os resultados finais da PCR convencional não são expressos como números. Normalmente, o PCR convencional é capaz de detectar apenas um único parâmetro.

O que é PCR em tempo real?

A PCR em tempo real pode detectar a amplificação dos produtos, à medida que os produtos são sintetizados. Com o desenvolvimento da tecnologia, a PCR se tornou uma técnica muito popular, especialmente para a detecção e identificação de bactérias nos alimentos. O PCR em tempo real utiliza um sistema de corante fluorescente e um termociclador equipado com capacidade de detecção de fluorescência.

Qual é a diferença entre PCR convencional e PCR em tempo real?

• A PCR convencional consome mais tempo, pois usa a eletroforese em gel para analisar os produtos de PCR amplificados. Por outro lado, a PCR em tempo real consome menos tempo, pois pode detectar amplificações durante as fases iniciais da reação.

• A PCR em tempo real coleta dados na fase de crescimento exponencial da PCR, enquanto a PCR tradicional coleta dados no ponto final da reação.

• Os resultados finais da PCR convencional podem não ser muito precisos, mas os resultados da PCR em tempo real são muito precisos.

• A PCR em tempo real é mais sensível que a PCR convencional.

• A PCR convencional tem uma resolução muito ruim, enquanto a PCR em tempo real pode detectar muito poucas alterações devido à alta resolução.

• A detecção de ponto final da PCR convencional possui um curto alcance dinâmico, enquanto a detecção em tempo real da PCR tem um amplo alcance dinâmico.

• Ao contrário da PCR convencional, técnicas de detecção automatizada são encontradas na PCR em tempo real.

• A PCR convencional é altamente sofisticada e exige mais trabalho do que a PCR em tempo real.

• Ao contrário da PCR em tempo real, a PCR convencional não pode discriminar entre bactérias mortas e vivas.

• A PCR em tempo real usa o sistema de corante fluorescente para detectar os produtos, enquanto a PCR convencional usa brometo de etídio e luz UV para visualizar bandas no meio de gel de agarose.