Diferença entre AFLP e RFLP

Diferença de chave - AFLP vs RFLP

Os estudos de DNA têm uma imensa importância na compreensão e determinação das relações filogenéticas, no diagnóstico de doenças genéticas e no mapeamento dos genomas do organismo. Várias técnicas associadas à análise de DNA também são usadas para a identificação de um gene em particular ou uma sequência de DNA em um conjunto de DNA desconhecido. Eles são conhecidos como marcadores moleculares. Polimorfismo de comprimento de fragmento amplificado (AFLP) e Polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição (RFLP) são dois desses marcadores moleculares (métodos) desenvolvidos em biologia molecular para detectar variação genética entre organismos. Ambos os métodos são igualmente importantes e têm vantagens e desvantagens. A principal diferença entre AFLP e RFLP é que AFLP envolve amplificação seletiva de PCR do DNA digerido, enquanto RFLP não envolve amplificação seletiva de PCR dos fragmentos de DNA.

CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é AFLP
3. O que é RFLP
4. Comparação lado a lado - AFLP vs RFLP
5. Resumo

O que é AFLP?

O AFLP (polimorfismo de comprimento de fragmento amplificado) é uma ferramenta importante em biologia molecular e é amplamente utilizado na análise de variação genética. O AFLP baseia-se na amplificação por PCR específica do DNA genômico fragmentado e na detecção do polimorfismo por autoradiografias por eletroforese em gel. A AFLP contribui amplamente para identificar diferenças genéticas em cepas ou espécies estreitamente relacionadas de vários reinos, incluindo plantas, animais, bactérias e fungos. A AFLP pode ser realizada com pequenas quantidades de amostras de DNA desconhecidas. Não requer conhecimento prévio da sequência e projeto de sondas.

Etapas da AFLP

Isolamento de DNA
Digestão do DNA com endonucleases de restrição
Ligação dos fragmentos de DNA restrito com adaptadores
Amplificação seletiva dos fragmentos com locais de restrição específicos
Separação dos produtos de PCR por eletroforese em gel
Visualização da matriz de gel por auto-radiografia

O AFLP é um método mais sensível e reprodutível que pode ser usado no perfil de DNA de vários táxons, incluindo fungos, bactérias, plantas e animais sem o conhecimento prévio das seqüências de DNA. Ajuda a identificar pequenas diferenças entre indivíduos nas populações devido à sua natureza altamente sensível. A AFLP também é importante no mapeamento do genoma, estudos forenses, teste dos pais, genotipagem, etc..

Figura 01: AFLP

O que é RFLP?

Os polimorfismos de comprimento de fragmento de restrição (RFLPs) são uma técnica usada para detectar as variações genéticas nas sequências de DNA homólogas. É o primeiro método desenvolvido para a criação de perfis de DNA. Os organismos têm impressões digitais ou perfis de DNA exclusivos. O RFLP serve como uma ferramenta importante para analisar a variação entre os perfis de DNA de organismos intraespecíficos ou intimamente relacionados, já que as seqüências homólogas têm diferentes locais de restrição (locais) que são exclusivos para um organismo em particular. Quando o DNA homólogo é digerido com endonucleases de restrição específicas, resultará em diferentes perfis de DNA que são únicos para cada indivíduo. Portanto, o principal deste método é a detecção de variação genética entre organismos, restringindo o DNA homólogo com enzimas de restrição específicas e a análise do polimorfismo do comprimento do fragmento via eletroforese em gel e transferência. Os padrões de mancha são únicos para cada organismo e caracterizam os genótipos específicos.

Etapas da RFLP

Isolamento de quantidade suficiente de DNA das amostras
Fragmentação das amostras de DNA com endonucleases de restrição específicas em sequência curta
Separação dos fragmentos resultantes com diferentes comprimentos por eletroforese em gel de agarose.
Transferência do perfil de gel para uma membrana por Southern blotting
Hibridação da membrana com sondas marcadas e análise do polimorfismo do comprimento do fragmento em cada perfil

A RFLP é uma técnica muito importante na detecção da herança da doença e na identificação do risco de ocorrência da doença entre os membros da família. O RFLP também é freqüentemente usado no mapeamento de genoma, identificando criminosos no forense, teste de paternidade etc. O RFLP também tem várias limitações. O RFLP requer o conhecimento prévio dos dados da sequência para projetar sondas para hibridação. Também requer o isolamento de uma quantidade suficiente de DNA da amostra para analisar, o que é difícil em estudos forenses..

Figura 01: mapeamento RRFLP

Qual é a diferença entre AFLP e RFLP?

ALFP vs RFLP
AFLP envolve amplificação seletiva por PCR do DNA digerido.	O RFLP não envolve PCR, a menos que seja PCR-RFLP.
Conhecimento de sequência
O conhecimento da sequência anterior não é necessário.	É necessário conhecimento prévio da sequência para sondas RFLP projetadas.
Confiabilidade
Isso é mais confiável.	Isso é menos confiável em comparação com o AFLP.
Eficiência na detecção de polimorfismo
Isso tem uma eficiência mais alta na detecção de polimorfismo que o RFLP.	Isso é menos eficiente em comparação com o AFLP.
Custo
Isso é um pouco caro comparado ao RFLP.	Isso é mais barato em comparação com o AFLP.
Formulários
As AFLPs foram aplicadas ao mapeamento de genoma, impressão digital de DNA, estudos de diversidade genética, testes de paternidade e análises forenses	A análise de RFLP é uma ferramenta importante no mapeamento de genoma, localização de genes para desordens genéticas, determinação de risco para doenças e testes de paternidade.

Resumo - AFLP vs RFLP

AFLP e RFLP são duas técnicas usadas como marcadores genéticos para a avaliação da diversidade e avaliação das relações genéticas na biologia molecular. O AFLP serve como um método eficiente e sensível para a detecção de polimorfismo genético entre organismos que o RFLP. No entanto, embora esses dois métodos tenham eficiências diferentes na detecção de variações genéticas, eles ainda são usados para impressões digitais de DNA e diagnóstico de doenças.

Referência:
«1 Garcia, Antonio A. F., Luciana L. Benchimol, Antônia M. M. Barbosa, Isaias O. Geraldi, Souza Jr. Cláudio L. e Anete P. De Souza. "Comparação de marcadores RAPD, RFLP, AFLP e SSR para estudos de diversidade em linhagens de milho tropical". Genética e Biologia Molecular. Sociedade Brasileira de Genética, 2004. Web. 19 de março de 2017
2. "Polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP)." Centro Nacional de Informação Biotecnológica. U.S. National Library of Medicine, n.d. Rede. 19 de março de 2017
3. Masiga D. K. e Turner C. M. (2004). "Análise de polimorfismo de comprimento de fragmento amplificado (restrição) (AFLP)". Métodos Mol Biol: 270: 173-86. NCBI. Rede. 19 de março de 2017

Cortesia da imagem:
1. "ALFP" Por Barbarossa na Wikipedia holandesa - Transferido de nl.wikipedia para o Commons. (Domínio Público) via Commons Wikimedia
2. “Mapeamento RFLP” Por Retama - Trabalho próprio (GFDL) via Commons Wikimedia

Ciência e Natureza