Diferença entre RT-PCR e QPCR

Reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

Os avanços na biotecnologia resultaram na descoberta de várias maneiras de lidar com as demandas por transplantes de órgãos ao longo dos anos. Antes, um indivíduo que doava voluntariamente qualquer órgão imediatamente após a morte a um paciente necessitado só poderia dar um impulso na operação para transplantes. Os estudos e pesquisas contínuos dos biólogos levam à descoberta de células-tronco.

Células-tronco se referem àquelas que são retiradas do DNA de um embrião, que servirão como fonte para a regeneração de células que seriam basicamente um clone do órgão em que o DNA foi recuperado. Embora os ativistas de direitos humanos façam lobby pela suspensão de tais procedimentos, operações bem-sucedidas comprovaram a eficácia do desenvolvimento de células-tronco em transplantes de órgãos.

Antes que alguém possa apreciar e entender completamente as células-tronco, é necessário familiarizar-se com as diferentes terminologias associadas a essa descoberta científica. O cultivo de células-tronco lida com o DNA e sua codificação. Assim, é vital que os estudantes ou quaisquer indivíduos interessados ​​no campo diferenciem entre RT-PCR e qPCR.

A reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa (RT-PCR) é uma das muitas variantes da reação em cadeia da polimerase, ou PCR. Essa técnica de laboratório é amplamente usada em biologia molecular para que os cientistas produzam várias cópias de uma sequência de DNA específica através de um processo cunhado como "amplificação". A diferença entre o RT-PCR e o tradicional PCR é que o RNA é primeiro transcrito ao contrário no seu complemento de DNA, que utiliza a transcriptase reversa. O novo DNA complementar contendo a transcrição reversa será amplificado usando a PCR tradicional ou a PCR em tempo real.

A maioria dos estudantes que estuda esse processo costuma cometer o erro de trocar a PCR de transcrição reversa e a PCR em tempo real, pois as duas são abreviadas da mesma forma. Para evitar confusão, os biólogos rotulam a PCR em tempo real como PCR quantitativa em tempo real ou qPCR.

O QPCR difere bastante do RT-PCR, pois o qPCR é responsável por medir a amplificação à medida que ela ocorre. Pode-se dizer que o RT-PCR inicia o processo de amplificação, enquanto o qPCR o mede conforme o procedimento ocorre.

PCR quantitativo em tempo real

O QPCR realmente revolucionou o método tradicional de abordagem unidirecional quando se trata de quantificar DNA e RNA, pois a aplicação do método qPCR possibilita aos biólogos determinar a concentração inicial do ácido nucleico mesmo antes que os resultados da reação tenham sido observados e anotado.

A aplicação do qPCR, que agora é considerada a técnica de análise mais poderosa e sensível para estudos genéticos, aumentou significativamente. Atualmente, está envolvido na análise quantitativa da expressão gênica, genotipagem, detecção de patógenos e análise do SNP, juntamente com medidas de interferência de RNA.

O QPCR é frequentemente combinado com o processo de transcrição reversa para quantificar o RNA mensageiro e o MicroRNA presentes nas células dos tecidos observados e experimentados. Isso então dá outra diferença visível entre os dois: RT-PCR pode ser usado para o processo de amplificação, mas precisa ser fundido com qPCR para fins de quantificação.

Sabe-se também que o QPCR é mais quantitativo, pois os dados podem ser coletados à medida que a fase de crescimento exponencial (log) da PCR progride. Os biólogos observam que a quantidade do subproduto da PCR é diretamente proporcional à quantidade de ácido nucleico modelo que será medido através do qPCR.

Por outro lado, a RT-PCR está longe de ter uma natureza quantitativa, pois a observância da intensidade da banda amplificada em um gel seguindo o padrão estabelecido de uma concentração pode levar a inferência "semi-quantitativa".

Resumo:

1.QPCR e RT-PCR são termos usados ​​em biotecnologia e utilizados para a produção de várias cópias de DNA.
2.RT-PCR é usado para amplificar a transcrição reversa do código de DNA; QPCR mede a amplificação.
3.RT-PCR é para amplificação, enquanto qPCR é para quantificação.
4.QPCR é de natureza quantitativa, enquanto RT-PCR não é.