Diferença entre YAC e M13 Phage Vector
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Diferença de chave - YAC vs M13 Phage Vector
A clonagem de DNA é um processo importante que permite a propagação de importantes fragmentos de DNA de organismos. Requer a união de DNA específico com o vetor DNA para criar DNA recombinante que se transforma no organismo hospedeiro. Um vetor é uma molécula de DNA que se comporta como veículo para transportar material genético estranho para outra célula ou organismo. Deve ser capaz de se replicar dentro do organismo hospedeiro e produzir várias cópias do DNA recombinante. Existem diferentes tipos de vetores usados na clonagem de DNA. O cromossomo artificial de levedura (YAC) e o vetor de fago M13 são dois tipos entre eles. A principal diferença entre o vetor de fago YAC e M13 é que YAC é um cromossomo artificial que se replica em células de levedura enquanto O vetor do fago M13 é um DNA circular de cadeia simples do bacteriófago M13 que se replica em E Coli células.
CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é o YAC
3. O que é o M13 Phage Vector
4. Comparação lado a lado - YAC vs M13 Phage Vector
5. Resumo
O que é um vetor YAC?
YAC é um cromossomo artificialmente construído que tem a capacidade de transportar um grande segmento de DNA estranho e se replicar dentro das células de levedura. Possui seqüências de centrômero, telômero e replicação autônoma, essenciais para replicação e estabilidade. O YAC também deve ter um marcador ou marcadores seletivos e locais de restrição para torná-lo um vetor de clonagem eficaz. Sequências grandes que variam de 1000 kb a 2000 kb podem ser inseridas no YAC e transferidas para o fermento.
Figura 01: Vetor YAC
O que é o vetor de fagos M13?
O bacteriófago M13 é um vírus que infecta e se replica em E Coli. O genoma do bacteriófago M13 é pequeno em tamanho, cerca de 6,7 kb. É um DNA de sentido simples, circular e positivo. Esse vírus infecta especificamente E Coli bactérias através de F. pilus. Uma vez que entra no ssDNA na bactéria, ele sintetiza sua cadeia complementar e se torna dsDNA ou a forma replicativa (RF) de M13. O RF pode se comportar como um plasmídeo dentro do organismo hospedeiro. O dsDNA replica dentro E Coli e produz ssDNA com novos fagos. Esses novos fagos são continuamente liberados do E Coli sem matar a célula hospedeira. No entanto, a infecção retarda o crescimento de E. coli. O dsDNA pode ser extraído de células bacterianas e usado como vetores na clonagem de DNA. Eles são conhecidos como vetores de fagos M13. Eles podem ser facilmente manipulados e usados de maneira semelhante aos vetores plasmídicos.
A capacidade inerente de infecção desses fagos M13 serve como uma boa qualificação para ser usada como vetor na clonagem de genes. Ao desenvolver M13 em um vetor, vários elementos devem ser incorporados ao seu genoma. São eles, um gene para a proteína repressora lac (lac I), a região proximal do operador da lac Z gene, um promotor lac e um local de clonagem múltipla (poliligante). Quando o dsDNA do M13 é usado como vetores, ele pode ser tratado como um vetor plasmídico. No entanto, o uso do ssDNA M13 tem vantagens no sequenciamento de DNA e na mutagênese dirigida ao local.
Como o vetor do fago M13 possui múltiplos locais de clonagem lacZ Na região, os vetores recombinados podem ser facilmente identificados pela triagem de colônia azul / branca em placas de ágar contendo IPTG e X-Gal. As placas azuis produzidas nas placas não contêm os fagos recombinados. Portanto, fagos com inserções podem ser selecionados para fins de clonagem.
Figura 02: Bacteriófago M13
Qual é a diferença entre YAC e M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector | |
| YAC é um cromossomo geneticamente modificado que tem a capacidade de transportar um grande segmento de DNA estranho e se replicar dentro das células de levedura. | O vetor do fago M13 é um vetor viral desenvolvido pelo bacteriófago M13 que é usado para inserir DNA estranho em E Coli. |
| Objetivo | |
| Os YACs foram projetados para clonar grandes fragmentos de DNA genômico em leveduras. | Os vetores de fagos M13 são usados para inserir DNA estranho em E Coli. |
| Inserir comprimento | |
| Os YACs podem conter inserções genômicas do tamanho de megabase (1000 kb - 2000 kb). | O tamanho das pastilhas é de cerca de 1.500 bps. |
| Construção | |
| O DNA YAC é difícil de purificar intacto e requer uma alta concentração para gerar o sistema vetorial YAC. | Ocorre através da cadeia de elétrons fotossintética cíclica. |
| Estabilidade | |
| YAC é instável. | Os fagos M13 podem ser facilmente extraídos. |
| Tamanho | |
| As enzimas são moléculas maiores. | Os fagos M13 são estáveis que o YAC. |
Resumo - YAC vs M13 Phage Vector
YAC é um sistema vetorial construído artificialmente usando uma região específica do cromossomo da levedura para inserir grandes segmentos de material genético nas células da levedura. O vetor do fago M13 é um sistema vetorial derivado do bacteriófago M 13 que utiliza E coli como organismo hospedeiro. Essa é a principal diferença entre o YAC e o M13 Phage Vector. Ambos são igualmente úteis na tecnologia de DNA recombinante e na clonagem de genes.
Referência:
1. "Vector". Genética-notas - vetor. N.p., n.d. Rede. 16 de maio de 2017. https://genetics-notes.wikispaces.com/Vector
2. "Cromossomo artificial de levedura". Wikipedia. Fundação Wikimedia, 21 de abril de 2017. Web. 16 de maio de 2017. .
Cortesia da imagem:
1. “M13B” Por J3D3 - Trabalho próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
