Diferença entre empilhamento e gel de separação

Diferença chave - Gel de empilhamento x separação Gel
 

Os termos gel de empilhamento e gel de separação são usados ​​para explicar a técnica de SDS-PAGE. A eletroforese em gel de SDS-PAGE ou dodecilsulfato de sódio-poliacrilamida é uma técnica de laboratório usada para separar moléculas de proteína com base em seus pesos moleculares. A teoria por trás da técnica é que proteínas com pesos moleculares diferentes mostram taxas de migração diferentes; moléculas de baixo peso molecular migram mais rapidamente, enquanto moléculas de alto peso molecular migram lentamente. O meio de migração é um gel. Existem dois tipos de géis denominados gel de empilhamento e gel de separação. o diferença chave entre o gel de empilhamento e o gel de separação é que o pH do gel de empilhamento é 6,8, enquanto o pH do gel de separação é 8,8.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é o Empilhamento de Gel
3. O que é Gel Separador
4. Relação entre empilhamento de gel e gel de separação
5. Comparação lado a lado - Gel de empilhamento versus gel de separação em forma de tabela
6. Resumo

O que é o Stacking Gel?

O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida de baixa concentração que é colocado no topo de um gel de resolução mais concentrado (gel de separação) na técnica SDS-PAGE. O gel de empilhamento é usado para melhorar a resolução da eletroforese. A resolução aumenta devido à diferença entre as concentrações do gel de empilhamento e do gel de resolução que afetam as proteínas da amostra. Como a concentração de poliacrilamida no gel de empilhamento é baixa, o tamanho dos poros é maior. Isso também ajuda a aumentar a separação.

O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida frouxo com grandes poros de cerca de 7% de poliacrilamida. Esses poros não atuam como uma barreira considerável para grandes moléculas de proteína. Portanto, este gel afeta um pouco a mobilidade dessas proteínas. Isso faz a separação de acordo com a mobilidade e o tamanho das proteínas, concentrando-as entre dois géis.

Figura 01: Gel de acrilamida SDS-PAGE

O pH do gel de empilhamento é 6,8. Seu pH é ácido do que o do gel de resolução em 2 unidades de pH. Este pH implica uma menor força iônica, portanto, uma maior resistência elétrica. Isso provoca a mobilidade das proteínas do que outras partículas carregadas presentes no gel.

O que é Gel Separador?

O gel de separação ou gel de resolução de uma técnica SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida altamente concentrado que é colocado no topo do gel de empilhamento com baixa concentração. O gel de separação contém uma grande quantidade de poliacrilamida (10%). O pH deste gel é mantido em pH = 8,8, que é um nível de pH mais alto que o do gel de empilhamento.

Figura 02: Aparelho de eletroforese em gel

Quando as moléculas de proteína atingem o gel de separação, a migração dessas moléculas é mais lenta porque o gel de separação é um gel de alta concentração com um tamanho de poro pequeno que pode atuar como uma barreira considerável para o movimento das moléculas de proteína. Essa desaceleração permite que as outras proteínas migrem lentamente para recuperar o atraso, resultando em uma banda estreita e concentrada entre os dois géis.

Qual é a relação entre empilhamento de gel e gel de separação?

• Os tipos Stacking Gel e Separating Gel são usados ​​no mesmo aparelho.

Qual é a diferença entre empilhar gel e separar gel?

Gel de empilhamento vs gel de separação
O gel de empilhamento é um gel de poliacrilamida de baixa concentração que é colocado no topo de um gel de resolução mais concentrado (gel de separação) na técnica SDS-PAGE.	O gel de separação ou gel de resolução de uma técnica de SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida altamente concentrado que é colocado no topo de um gel de empilhamento com baixa concentração.
Canal
O gel de empilhamento é colocado no gel de resolução (separação).	O gel de separação é colocado no fundo do recipiente usado para eletroforese em gel.
Concentração
A concentração do gel de empilhamento é alta.	A concentração do gel de separação é baixa.
Conteúdo de poliacrilamida
O gel de empilhamento contém cerca de 7% de poliacrilamida.	O gel separador contém cerca de 10% de poliacrilamida.
pH
O pH do gel de empilhamento é 6,8.	O pH do gel de separação é 8,8.
Tamanho dos poros
Poros grandes estão presentes no gel de empilhamento.	Poros pequenos estão presentes na separação de gel.
Resolução
O empilhamento em gel oferece melhor resolução.	Separar o gel dá uma resolução ruim.

Sumário - Empilhamento Gel vs Separação Gel

O gel de empilhamento e o gel de separação são dois tipos de géis de poliacrilamida usados ​​para obter uma melhor separação das moléculas de proteína em uma determinada amostra. A diferença entre o gel de empilhamento e o gel de separação é que o pH do gel de empilhamento é 6,8, enquanto o pH do gel de separação é 8,8.

Referência:

1. "Eletroforese em gel de poliacrilamida". Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (Teoria): Laboratório Virtual de Biologia Molecular II: Engenharia Biotecnológica e Biomédica: Laboratório Virtual de Amrita Vishwa Vidyapeetham. Disponivel aqui  
2. "Como funciona o SDS-PAGE". Bitesize Bio, 16 de fevereiro de 2018. Disponível aqui
3. “Gel empilhável SDS-PAGE - BICH 608 (Polymenis-Pettigrew).” Google Sites. Disponivel aqui 

Cortesia da imagem:

1.'SDS-PAGE Gel de acrilamida 'Por Bensacount na Wikipedia em inglês, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. 'Aparelho de eletroforese em gel' Por Jeffrey M. Vinocur - Trabalho próprio, (CC-BY 2.5) via Commons Wikimedia