Diferença entre a camada fina de papel e a cromatografia em coluna

Diferença chave - Papel vs Camada fina vs Coluna Cromatografia
 

Cromatografia em papel, cromatografia em camada fina e cromatografia em coluna são três tipos de técnicas cromatográficas. o diferença chave entre a cromatografia em papel, a cromatografia em camada fina e a cromatografia em coluna são baseadas no tipo de fase estacionária usada na técnica de cromatografia. A cromatografia de papel usa papel de celulose como fase estacionária, a cromatografia em camada fina usa alumina ou gel de sílica como fase estacionária, enquanto a cromatografia em coluna usa uma coluna embalada com um material de matriz adequado como fase estacionária.

No processo de separação e identificação de biomoléculas, como proteínas e carboidratos, a cromatografia é uma importante técnica biofísica utilizada. A cromatografia separa os compostos com base em sua solubilidade, tamanho e carga. Com base no mecanismo de separação, a cromatografia utiliza mecanismos como troca iônica, absorção, partição e exclusão de tamanho e existem três técnicas cromatográficas; ou seja, papel, camada fina e cromatografia em coluna. A cromatografia em papel baseia-se na adsorção e na solubilidade sólido-líquido do composto e utiliza um papel de celulose como fase estacionária. A cromatografia em camada fina é baseada na adsorção de líquido-sólido de moléculas. Tem uma fase estacionária que normalmente é feita de alumina ou sílica gel e a fase móvel que é o solvente. A cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou carga.

CONTEÚDO

1. Visão geral da cromatografia e principais diferenças
2. O que é Cromatografia em Papel
3. O que é cromatografia em camada fina
4. O que é cromatografia em coluna
5. Semelhanças entre papel, camada fina e cromatografia em coluna
6. Comparação lado a lado - cromatografia em coluna vs papel versus camada fina versus coluna em forma de tabela
7. Resumo

O que é cromatografia em papel?

A cromatografia em papel é o tipo mais simples de cromatografia usada e não é usada para pesquisas extensas. É usado principalmente em laboratórios estudantis para identificar biomoléculas como aminoácidos e carboidratos presentes nas misturas. A cromatografia em papel utiliza uma fase estacionária que é feita usando papel de celulose ou papel de filtro Whatman e uma fase móvel que geralmente é preparada com solventes orgânicos como o n-butanol, etc. A fase estacionária é saturada com água, tornando a fase estacionária líquida. Assim, quando os compostos são detectados e deixados correr na presença da fase móvel, dependendo da solubilidade dos compostos, eles são separados. Assim, após o desenvolvimento do cromatograma, a coloração pode ser feita para determinar a execução do comprimento de cada composto. O fator de retenção pode assim ser calculado.

Figura 01: Cromatografia em papel

A cromatografia em papel pode ainda ser classificada como cromatografia em papel ascendente e cromatografia em papel descendente, dependendo da direção do solvente em execução.

O que é cromatografia em camada fina?

Cromatografia em camada fina ou TLC é uma técnica comumente usada para identificar diferentes aminoácidos presentes em uma mistura ou para a identificação de proteínas. A técnica de separação é baseada na adsorção sólido-líquido. Durante a cromatografia em camada fina, uma placa feita de alumina ou sílica gel é usada como fase estacionária. A mistura de solventes varia conforme o requisito e pode usar diferentes combinações de compostos orgânicos como n-butanol, ácido acético e água para preparar o solvente. Os compostos a serem separados são manchados na placa e imersos na mistura de solventes. Uma vez que o solvente viaja com base na ação capilar dada pela placa, os compostos localizados na placa também se movem dependendo da sua solubilidade no solvente.

Figura 02: Cromatografia em camada fina

A detecção dos pontos após o cromatograma é realizada por diferentes procedimentos de coloração. Alguns usam coloração com ninidrina, que é um método bastante tóxico de coloração. Cromatogramas modernos de camada fina usam técnicas de fluorescência para visualizar o cromatograma após a execução. Dependendo das distâncias percorridas, o tempo de retenção de cada composto pode ser calculado. Isso pode ser usado para identificar o tipo de composto separado com base na mistura usada. A CPT é usada principalmente para identificar aminoácidos em uma mistura de proteínas e também para separar diferentes tipos de monossacarídeos presentes em uma mistura.

O que é cromatografia em coluna?

Cromatografia em coluna é um termo amplo usado para descrever muitos tipos de técnicas de cromatografia que usam o método de separação baseado em coluna. Na cromatografia em coluna, uma coluna física é usada com um material de embalagem para separar os compostos. A separação pode ser baseada em diferentes propriedades físicas exibidas pelos compostos. Essas propriedades podem ser a carga, tamanho, conformação 3D e capacidade de ligação, etc. Assim, a coluna empacotada com o material da matriz atua como fase estacionária e o tampão de lavagem aplicado à coluna atua como fase móvel.

Se as moléculas são separadas com base no tamanho, o material de embalagem é embalado de maneira a deixar poros para os compostos viajarem. Assim, as moléculas maiores que não podem fluir através dos poros são eluídas primeiro, enquanto as moléculas menores levam muito mais tempo para eluir.

Figura 03: Cromatografia em coluna

Se as moléculas forem separadas com base em sua carga, a fase estacionária conterá um trocador de ânions ou cátions para o qual os compostos serão atraídos com base em sua carga. Assim, durante o passo de lavagem, os compostos não ligados serão eluídos. Após a adição do tampão de eluição, os compostos carregados ligados serão eluídos. A detecção desses eluentes é baseada principalmente em técnicas espectrofotométricas.

Quais são as semelhanças entre a camada fina de papel e a cromatografia em coluna?

• Todas as três técnicas de Cromatografia de Camada Fina e Coluna de Papel são usadas para a separação de biomoléculas, como aminoácidos, proteínas e carboidratos.
• As técnicas de cromatografia em camada fina e coluna de papel têm uma fase móvel e uma fase estacionária.
• As técnicas de cromatografia em camada fina e coluna de papel utilizam mecanismos biofísicos para separação.

Qual é a diferença entre a camada fina de papel e a cromatografia em coluna?

Cromatografia de coluna vs papel versus camada fina
Cromatografia de papel	A cromatografia em papel é uma técnica cromatográfica usada para separar compostos com base na adsorção líquido-líquido e na solubilidade do composto. Utiliza papel celulósico como fase estacionária.
Cromatografia em camada fina	A cromatografia em camada fina é outra técnica cromatográfica baseada na adsorção de líquido-sólido de moléculas. Possui uma fase estacionária feita de alumina ou gel de sílica e um solvente como fase móvel, que é o solvente.
Cromatografia em coluna	A cromatografia em coluna usa uma coluna empacotada com uma matriz que é usada para separar moléculas principalmente com base em seu tamanho, afinidade ou carga.
Fase estacionária
Cromatografia de papel	Papel feito de nitrocelulose de Whatman é usado como fase estacionária na cromatografia em papel.
Cromatografia em camada fina	Alumina ou sílica gel é usada como fase estacionária da cromatografia em camada fina.
Cromatografia em coluna	Uma coluna embalada com material de embalagem adequado é usada como fase estacionária na cromatografia em coluna.
Na fase móvel
Cromatografia de papel	O solvente em funcionamento é a fase móvel da cromatografia em papel.
Cromatografia em camada fina	O solvente em funcionamento é a fase móvel da cromatografia em camada fina.
Cromatografia em coluna	O tampão de lavagem é a fase móvel da cromatografia em coluna.
Mecanismos usados ​​para separação
Cromatografia de papel	A cromatografia em papel é baseada na absorção sólido-líquido.
Cromatografia em camada fina	A cromatografia em camada fina é baseada na absorção sólido-líquido.
Cromatografia em coluna	A cromatografia em coluna é baseada na exclusão de tamanho, carga e forma.
Tampão de eluição
Cromatografia de papel	Não requerido por cromatografia em papel.
Cromatografia em camada fina	Não é necessário para cromatografia em camada fina.
Cromatografia em coluna	Necessário na cromatografia em coluna.
Detecção
Cromatografia de papel	Coloração e determinação do fator de retenção.
Cromatografia em camada fina	Coloração e determinação do fator de retenção.
Cromatografia em coluna	Determinação espectrofotométrica.

Sumário - Vs Camada fina de papel Coluna Cromatografia

Cromatografia em papel, TLC e cromatografia em coluna são técnicas de separação usadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos e carboidratos (principalmente monossacarídeos). A cromatografia de papel utiliza um papel de celulose como fase estacionária, e o mecanismo de separação é baseado na adsorção sólido-líquido. A TLC também usa mecanismos de adsorção sólido-líquido. As moléculas são separadas na fase estacionária, dependendo de sua solubilidade na fase móvel. A cromatografia em coluna utiliza propriedades físicas como tamanho, forma, carga e peso molecular do composto para separar. A coluna empacotada com o material da matriz atua como a fase estacionária, enquanto o tampão de lavagem atua como a fase do solvente. Essa é a diferença entre uma camada fina de papel e a cromatografia em coluna.

Referência:

1. Clark, Jim. "CROMATOGRAFIA DE CAMADA FINA." Cromatografia de camada fina, 2007. Disponível aqui 
2. Coskun, Ozlem. "Técnicas de separação: cromatografia." Clínicas do Norte de Istambul, Kare Publishing, 2016. Disponível aqui 

Cortesia da imagem:

1. 'Tanque de cromatografia' (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia  
2.'Tlc sequence'By Quantockgoblin, (Domínio Público) via Commons Wikimedia
3.'Cromatografia em coluna '(domínio público) via Commons Wikimedia