Diferença entre nitrocelulose e PVDF
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Diferença de chave - Nitrocelulose vs PVDF
O Western blotting é um método que permite a detecção e quantificação de proteínas específicas a partir de uma amostra de proteína. A confiabilidade da técnica depende da seleção de uma membrana correta para absorção de proteínas do gel. Existem diferentes tipos de membranas microporosas. As membranas de nitrocelulose e PVDF são duas dessas membranas preferidas pelos pesquisadores devido a seus atributos especiais em relação aos outros tipos de membranas. A seleção entre a nitrocelulose ou PVDF também é outro desafio na transferência ocidental. Tanto a nitrocelulose quanto o PVDF têm uma alta capacidade de absorção de proteínas. A principal diferença entre a membrana de nitrocelulose e PVDF é que as membranas de nitrocelulose não têm a capacidade de remover anticorpos e reutilizar a membrana para reprovação de anticorpos, enquanto as membranas de PVDF têm a capacidade de remover e reutilizar.
CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é nitrocelulose
3. O que é PVDF
4. Comparação Lado a Lado - Nitrocelulose vs PVDF
5. Resumo
O que é nitrocelulose?
A nitrocelulose é um polímero fabricado pelo tratamento de celulose com ácido nítrico e é usado para fabricar membranas microporosas na biologia molecular, especialmente para técnicas de transferência, como transferência para o sul, norte e oeste. Os tamanhos dos poros das membranas de nitrocelulose variam de 3 a 20 µm. As membranas microporosas de nitrocelulose facilitam a detecção de reações imunoquímicas que ocorrem na superfície da membrana. Portanto, as membranas de nitrocelulose são frequentemente utilizadas para imobilização de proteínas e detecção de proteínas específicas no Western blotting. As membranas de nitrocelulose também podem imobilizar glicoproteínas e ácidos nucleicos.
As membranas de nitrocelulose são preferidas em ensaios de fluxo lateral devido a várias características. Membranas de nitrocelulose absorvem proteínas em alta concentração. O solvente usado para molhar a membrana não diminui a absorção de proteínas da membrana de nitrocelulose. As membranas de nitrocelulose podem ser facilmente cortadas no tamanho de gel desejado e transferir proteínas do gel para a membrana por transferência elétrica ou capilar. A nitrocelulose permite um fluxo mais rápido de proteínas através da membrana com alto potencial de ligação. A nitrocelulose mostra uma força melhorada no manuseio. Outro atributo especial da membrana de nitrocelulose é que ela pode ser facilmente colada com adesivos resistentes à água não solventes em vários suportes plásticos.
Figura 01: Membrana de nitrocelulose para western blotting
O que é PVDF?
O difluoreto de polivinilideno (PVDF) é um fluoropolímero produzido pela polimerização do difluoreto de vinilideno e possui uma alta capacidade de imobilização de proteínas. Portanto, membranas microporosas produzidas a partir de PVDF são usadas nas técnicas de Western blotting para analisar proteínas específicas das misturas de proteínas. As membranas de PVDF também podem ser usadas para análise de aminoácidos e sequenciamento de proteínas. A característica mais importante da membrana de PVDF sobre a membrana de nitrocelulose é que ela pode ser facilmente removida dos anticorpos e reutilizada para sondas de anticorpos subsequentes.
As membranas de PVDF são mais espessas do que as membranas de nitrocelulose; portanto, mais resistente a danos durante a reutilização. As membranas de PVDF são altamente hidrofóbicas. Portanto, eles devem ser embebidos em metanol ou isopropanol antes do uso.
Qual é a diferença entre Nitrocelulose e PVDF?
Nitrocelulose vs PVDF | |
| A nitrocelulose é um polímero composto de celulose. | PVDF é um fluoropolímero produzido pela polimerização do difluoreto de vinilideno. |
| Tamanho dos poros da membrana | |
| Os tamanhos típicos de poros são 0,1, 0,2 ou 0,45μ | Os tamanhos típicos de poros são 0,1, 0,2 ou 0,45μm |
| Capacidade de ligação às proteínas | |
| A nitrocelulose tem uma capacidade de ligação às proteínas de 80 a 100 μg / cm2. | O PVDF tem uma capacidade de ligação às proteínas de 170 a 200 μg / cm2. |
| Sensibilidade | |
| Isso tem uma baixa sensibilidade em comparação com o PVDF. | Isso tem uma alta sensibilidade. |
| Detecção de proteínas pouco expressas | |
| Como a sensibilidade é baixa nas membranas de nitrocelulose, não é adequado para a detecção de proteínas com baixa expressão. | Isso é mais adequado para a detecção de proteínas pouco expressas devido à sua alta sensibilidade. |
| Barulho de fundo | |
| Isso reduz o ruído de fundo | Isso tem um ruído de fundo mais alto. |
| Interações com proteínas | |
| Moléculas de proteína se ligam às membranas de nitrocelulose através de interações hidrofóbicas. | As proteínas se ligam às membranas de PVDF por meio de interações hidrofóbicas e dipolo. |
| Natureza da membrana | |
| A nitrocelulose é quebradiça e frágil. No entanto, versões de nitrocelulose estão disponíveis e são resistentes. | PVDF é mais durável e tem maior resistência química. |
| Capacidade de strip e reutilização | |
| A nitrocelulose pode ter dificuldade em remover e reprovar sem perder o sinal. | O PVDF é ideal para aplicações de reprovação e sequenciamento. |
| Aptidão | |
| A nitrocelulose é ideal para detectar proteínas de baixo peso molecular. | PVDF é mais adequado para detectar proteínas de maior peso molecular. |
| Outros usos | |
| A nitrocelulose pode ser usada para análise de ácidos nucleicos e transferência de pontos / ranhuras. | O PVDF pode ser usado para sequenciamento de proteínas e sistemas de ensaio em fase sólida. |
| Custo | |
| Isso é mais barato que as membranas de PVDF. | Isso é mais caro que as membranas de nitrocelulose. |
| Necessidade de pré-umedecimento | |
| Membranas de nitrocelulose não requerem pré-embebimento com metanol | As membranas de PVDF requerem pré-embebimento com metanol. |
Resumo - Nitrocelulose vs PVDF
As membranas de nitrocelulose foram as primeiras membranas usadas comercialmente para o ensaio de fluxo lateral. Eles têm uma alta capacidade de absorção de proteínas. Portanto, as membranas de nitrocelulose são usadas na transferência ocidental. O PVDF é outro tipo de membrana usada na transferência ocidental e também possui uma alta capacidade de absorção de proteínas. Ambos os tipos são utilizados no Western Blotting para análise de proteínas. No entanto, as membranas de PVDF têm atributos mais especiais, tornando-as mais adequadas do que as membranas de nitrocelulose para a transferência ocidental. Porém, as membranas de nitrocelulose são mais adequadas para a detecção de proteínas com baixo peso molecular, as membranas de PVDF são mais adequadas para a detecção de proteínas com alto peso molecular. Essa é a diferença entre membranas de nitrocelulose e PVDF.
Cortesia da imagem:
1. "Western blot transfer" Por Bensaccount na Wikipedia em inglês (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
Referência:
1. Luque-Garcia, José L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun e Thomas A. Neubert. "Uso de membranas de nitrocelulose para caracterização de proteínas por espectrometria de massa por dessorção a laser / ionização assistida por matriz". Química Analítica. Biblioteca Nacional de Medicina dos EUA, 15 de julho de 2006. Web. 28 de março de 2017
2. "Marcadores moleculares e biotecnologia de plantas". Google Livros. N.p., n.d. Rede. 28 de março de 2017
Segunda-feira, 8 de abril de 2013 Tweet. "A mágica está na membrana: escolha sabiamente para obter os melhores resultados de Western Blot". Biocompare. N.p., 08 de abril de 2013. Web. 28 de março de 2017
