Diferença entre imunofluorescência e imuno-histoquímica

Diferença chave - Imunofluorescência x Imuno-histoquímica
 

O diagnóstico de doenças, que utiliza métodos biológicos moleculares, tornou-se uma área emergente da tecnologia de laboratório clínico. Inclui todos os testes e métodos para identificar uma doença e entender a causa de uma doença, analisando DNA, RNA ou proteínas expressas em um organismo. Os rápidos avanços no diagnóstico molecular permitiram pesquisas básicas sobre doenças transmissíveis e não transmissíveis. Estes são utilizados para determinar alterações nos níveis de sequência ou expressão em genes ou proteínas cruciais envolvidos na doença. A imunofluorescência (IF) e a imuno-histoquímica (IHC) são duas dessas técnicas amplamente utilizadas na biologia do câncer. O IF é um tipo de IHC em que um método de detecção de fluorescência é usado para analisar anticorpos monoclonais e policlonais, enquanto o IHC usa métodos químicos para detectar os anticorpos monoclonais e policlonais. Esta é a principal diferença entre IF e IHC.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é imunofluorescência 
3. O que é imuno-histoquímica
4. Semelhanças entre imunofluorescência e imuno-histoquímica
5. Comparação lado a lado - imunofluorescência versus imuno-histoquímica na forma de tabela
6. Resumo

O que é imunofluorescência (IF)?

A imunofluorescência é uma técnica de detecção em que os anticorpos utilizados no ensaio são marcados com corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para fins de detecção. Os anticorpos secundários marcados podem resultar em sinais de fundo indesejados; portanto, a técnica IF é baseada na marcação do próprio anticorpo primário no momento, a fim de evitar sinais indesejados durante a detecção. Através desta técnica, a ligação inespecífica entre o anticorpo primário e o secundário é impedida, e é mais rápida, pois não há etapa de incubação secundária envolvida. A qualidade dos dados também é aprimorada.

Figura 01: Coloração dupla por imunofluorescência para BrdU, NeuN e GFAP

Fluorocromos ou corantes fluorescentes são compostos que podem absorver radiação, de preferência radiação ultravioleta que é excitada. Quando as partículas atingem o estado fundamental a partir do estado excitado, emitem radiação que é capturada e detectada por um detector para formar um espectro. É de grande importância que o marcador fluorescente seja compatível e estável para a reação específica e que seja adequadamente conjugado com o anticorpo para obter resultados precisos. Um dos fluorocromos mais utilizados é o isotiocianato de fluoresceína (FITC), de cor verde, com comprimentos de onda do pico de absorção e emissão de 490 nm e 520 nm, respectivamente. A rodamina, outro agente usado no FI, é de cor vermelha e possui comprimentos de onda de pico de absorção e emissão distintos de 553 nm e 627 nm.

O que é imuno-histoquímica (IHC)?

O IHC é um método de teste molecular praticado para identificar e confirmar a presença do antígeno na célula alvo. A célula alvo pode ser uma partícula infecciosa, um patógeno microbiano ou uma célula tumoral maligna. O IHC utiliza anticorpos monoclonais e policlonais para determinar a presença de antígenos presentes na superfície celular das células alvo. A técnica é baseada na ligação antígeno-anticorpo. Um marcador de detecção é conjugado com esses anticorpos para detectar a presença ou a ausência do antígeno específico. Esses marcadores podem ser marcadores químicos, como enzimas, anticorpos marcados com fluorescência ou anticorpos marcados por rádio.

Figura 02: Fatia de rato-cérebro corada por imuno-histoquímica

A aplicação mais popular do IHC está na biologia das células cancerígenas para identificar a presença de tumores malignos, mas também é usada para a detecção de doenças infecciosas.

Quais são as semelhanças entre imunofluorescência e imuno-histoquímica?

• A imunofluorescência e a imuno-histoquímica ocorrem em condições in vitro.
• Ambas as técnicas são baseadas no antígeno-anticorpo
• Ambas são técnicas muito rápidas.
• Os resultados das técnicas são reproduzíveis.
• Ambos melhoraram a qualidade dos dados.
• Essas técnicas usadas no diagnóstico de câncer e doenças infecciosas.

Qual é a diferença entre imunofluorescência e imuno-histoquímica?

Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica
IF é uma técnica de detecção em que os anticorpos utilizados no ensaio são marcados com corantes fluorescentes ou proteínas fluorescentes para detecção.	IHC é uma técnica de detecção em que os anticorpos utilizados no ensaio são marcados com produtos químicos ou elementos radioativos para detecção.
Precisão
A precisão é maior na técnica IF, se comparada à IHC.	A precisão é menor no IHC.
Especificidade
IF é mais específico.	IHC é menos específico.

Resumo - Imunofluorescência vs Imuno-histoquímica

Os mecanismos moleculares trouxeram muitas mudanças no campo da medicina, dando origem a métodos avançados de teste molecular que provocaram revoluções no campo do diagnóstico. Essas invenções levaram a uma identificação e confirmação rápidas e precisas da doença, permitindo assim a administração e produção bem-sucedidas de medicamentos. Essas técnicas também são utilizadas na farmacologia, a fim de encontrar os alvos dos medicamentos e confirmar as propriedades farmacocinéticas do medicamento durante o metabolismo do medicamento. IF e IHC são dois métodos de diagnóstico baseados no conceito de ligação a antígeno e anticorpo, embora o modo de detecção em ambas as técnicas seja diferente. O IF usa o princípio da fluorescência para detectar o antígeno e o IHC usa o conceito de conjugação química para detectar o antígeno. Esta é a diferença entre IF e IHC.

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Referências:

1. Aoki, Valéria, et al. "Imunofluorescência direta e indireta." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Disponível aqui. Acessado em 25 de agosto de 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Aplicações de imuno-histoquímica." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Publicações Medknow & Media Pvt Ltd, agosto de 2012, disponível aqui. Acessado em 25 de agosto de 2017.

Cortesia da imagem:

1. “Dupla coloração de imunofluorescência para BrdU, NeuN e GFAP” Por Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Entrega intranasal de fator de crescimento transformador- beta1 em camundongos após acidente vascular cerebral reduz o volume de infarto e aumenta a neurogênese na zona subventricular; PMID 19077183 (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia
2. “Hipotálamo de um tecido de camundongo corado por imuno-histoquímica do ABC” Por zabbn - Trabalho próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia