Diferença entre Gram Stain e ácido rápido

Diferença chave - Gram Stain vs Acid Fast
 

As bactérias são microorganismos muito pequenos. Eles são transparentes e sua detecção é difícil em condições de vida e sem manchas. Assim, vários métodos de coloração são desenvolvidos para facilitar a detecção bacteriana. Existem três tipos principais de técnicas de coloração: coloração simples, coloração diferencial e coloração estrutural. A coloração diferencial é uma técnica que utiliza mais de uma mancha para diferenciar bactérias. A coloração de Gram e a de ácido rápido são mais conhecidas popularmente como manchas diferenciais. A coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial, que separa as bactérias em dois grupos, conhecidos como bactérias Gram-positivas e bactérias Gram-negativas. A mancha ácido-rápida é uma mancha diferencial usada para identificar organismos rapidamente ácidos, como Mycobacterium, de organismos rápidos não ácidos. Esta é a principal diferença entre a coloração de Gram e a mancha Acid Fast.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é Gram Stain 
3. O que é Acid Fast
4. Semelhanças entre a coloração de Gram e o ácido rápido
5. Comparação lado a lado - Gram Stain vs Acid Fast em forma de tabela
6. Resumo

O que é Gram Stain?

A coloração de Gram é uma importante técnica de coloração diferencial usada para identificação bacteriana em microbiologia. Essa técnica foi introduzida pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram em 1884. A coloração de Gram categoriza as bactérias em dois grupos principais denominados gram-positivos e gram-negativos, que são muito importantes na classificação e identificação bacteriana. Microbiologistas realizam coloração de Gram como um passo inicial na caracterização bacteriana durante seus estudos.

As bactérias são agrupadas com base nas diferenças na parede celular. As bactérias gram-positivas são compostas por uma espessa camada de peptidoglicano em sua parede celular, enquanto as bactérias gram-negativas são compostas por uma fina camada de peptidoglicano em sua parede celular. O resultado da coloração de Gram será baseado na diferença na espessura da camada de peptidoglicano da parede celular.

A coloração de gramas é realizada usando quatro reagentes diferentes, a saber; mancha primária, mordente, agente descolorante e contra-mancha. Violeta de cristal e safranina são usadas como manchas primárias e contrárias, respectivamente, enquanto gramas de iodo e álcool 95% são usadas como mordente e descolorante, respectivamente. Os passos básicos da mancha de gramas são os seguintes;

1. Um esfregaço bacteriano é preparado em uma lâmina de vidro limpa, fixada a quente e resfriada.
2. A mancha é inundada com violeta de cristal por 1-2 minutos.
3. O esfregaço é lavado com água da torneira lenta para remover manchas em excesso.
4. Gramas de iodo é aplicado ao esfregaço por 1 minuto.
5. O esfregaço é lavado com água da torneira lenta
6. O esfregaço é lavado com álcool a 95% por 2 a 5 segundos e lavado com água corrente da torneira lenta.
7. O esfregaço é corado com safranina por 1 minuto
8. O esfregaço é lavado com água corrente lenta, seco e observado ao microscópio.

No final da mancha Gram, as bactérias Gram-negativas serão observadas na cor rosa, enquanto as bactérias Gram-positivas serão observadas na cor púrpura.

Figura 01: Bactérias Gram-negativas e Gram-positivas

O resultado da coloração de gramas é decidido pela espessura da camada de peptidoglicano em sua parede celular. Durante a etapa de descoloração, a mancha primária e o mordente são facilmente removidos das bactérias gram-negativas e tornam-se incolores, uma vez que possuem uma fina camada de peptidoglicano. A mancha primária é retida nas bactérias gram-positivas, uma vez que possuem uma espessa camada de peptidoglicano. A contra-mancha não será eficaz para bactérias gram-positivas devido à retenção da mancha primária. Assim, gramas de bactérias positivas serão visíveis na cor primária da mancha, ou seja, na cor roxa. A contra-mancha irá manchar as bactérias gram-negativas e elas serão visíveis na cor escolhida, que é a cor da safranina. Portanto, é fácil categorizar as bactérias em dois grupos por coloração de gram e é valioso na diferenciação e identificação bacteriana.

O que é ácido rapidamente?

A rapidez ácida é uma propriedade física de certas bactérias, especificamente sua resistência à descoloração por ácidos durante os procedimentos de coloração. Uma vez corados, esses organismos resistem a procedimentos de descoloração baseados em ácido diluído e / ou etanol, comuns em muitos protocolos de coloração. Assim, o nome 'ácido rápido' é dado a esses organismos. Essa propriedade é mostrada devido a um alto nível de material ceroso (ácidos micólicos) em suas paredes celulares. Este teste é crítico para a identificação de Mycobacterium tuberculosis.

Figura 2: Micobactérias ácidas rápidas

Essa mancha rápida com ácido foi desenvolvida por Paul Ehrlich em 1882. A técnica rápida com ácido de Ehrlich foi modificada por Ziehl-Neelsen e agora é usada com mais frequência. O procedimento de coloração rápida com ácido envolve três reagentes diferentes. Carbol fuschin é usado como a mancha primária. O álcool ácido é usado como agente descolorante. O azul de metileno é usado como contra-mancha. O procedimento de coloração é realizado da seguinte maneira.

1. A mancha primária (carbol fucsina) é aplicada à amostra fixa na lâmina (todas as células serão coradas em vermelho).
2. A lâmina é aquecida por vapor durante 5 minutos, o que leva as manchas às células adequadamente.
3. Em seguida, é adicionada a solução descolorante (isso remove o corante vermelho de todas as células, exceto as bactérias ácidas rápidas).
4. O azul de metileno é adicionado como uma contra-mancha (colore todas as células bacterianas descoradas).
5. Bactérias ácidas rápidas permanecem vermelhas, enquanto bactérias não ácidas manchadas de azul.

Quais são as semelhanças entre a coloração de Gram e o ácido rápido?

• A coloração de Gram e o ácido rápido são duas técnicas de coloração diferencial.
• Ambas as técnicas categorizam as bactérias em dois grupos.
• Ambas as técnicas usam duas manchas e uma descolorante.

Qual é a diferença entre Gram Stain e Acid Fast?

Acid Fast vs Stain Gram
A coloração de Gram é uma técnica de coloração diferencial, que separa as bactérias em dois grupos: bactérias Gram-positivas e bactérias Gram-negativas..	A mancha Acid Fast é uma mancha diferencial usada para identificar organismos fast-acid de organismos fast-acid não.
Mancha primária
A violeta de cristal é a mancha primária comumente usada na coloração de gram.	Carbol fucsina é a mancha primária usada em ácido rápido.
Agente descolorante
Álcool a 95% é usado como agente descolorante na coloração de Gram.	O álcool ácido é usado como um agente descolorante em ácido rápido.
Counter Stain
A coloração de Gram usa safranina como contra-coloração.	A coloração rápida com ácido usa azul de metileno como contra-coloração.
Observação
Bactérias gram-negativas são observadas na cor escolhida e gramas de bactérias positivas são observadas na cor roxa.	Bactérias ácidas rápidas são observadas na cor vermelha e bactérias rápidas não ácidas são observadas na cor azul.

Resumo - Gram Stain vs Acid Fast

A visualização de microrganismos no estado vivo é difícil. Portanto, manchas biológicas e procedimentos de coloração são usados ​​extensivamente para estudar suas propriedades. A coloração diferencial é um tipo de técnica de coloração usada para diferenciar bactérias. A coloração de Gram e a coloração rápida com ácido são duas técnicas de coloração diferencial. A coloração de Gram diferencia bactérias gram-negativas e bactérias gram-positivas com base na espessura de suas paredes celulares. A coloração rápida com ácido diferencia as bactérias rápidas com ácido das bactérias rápidas sem ácido, com base no teor de ácido micólico na parede celular. Esta é a diferença entre ácido rápido e mancha de grama.

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Referências:

1. Aryal, Sagar. “Princípio, Procedimento, Interpretação e Exemplos de Manchas Rápidas em Ácidos.” Notas on-line de microbiologia. N. 8, 8 de maio de 2017. Web. Disponivel aqui. 20 de julho de 2017.
2. Manchas diferenciais para identificação de bactérias: Gram, ácido-rápido e endosporo. N.p., n.d. Rede. Disponivel aqui. 20 de julho de 2017.

Cortesia da imagem:

1. “Linfonodo - infecção micobacteriana atípica (MAI) - mancha AFB” de Yala Rosen (CC BY-SA 2.0) via Flickr
2. “Gram stain 01” Por Y tambe - arquivo de Y tambe (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia