Diferença entre ELISA direto e indireto

Diferença de chave - ELISA direto vs indireto
 

Um imunoensaio enzimático (ELISA), também conhecido como imunoensaio enzimático, é um teste sorológico que detecta anticorpos no sangue. É usado como uma ferramenta de diagnóstico para descobrir se o paciente foi exposto a um tipo específico de vírus ou outro agente infeccioso (antígeno) e se o corpo produziu anticorpos contra a infecção. O ELISA também pode identificar as infecções passadas e atuais. Portanto, o ELISA é frequentemente usado como teste de pré-triagem pelos médicos antes da análise aprofundada das doenças. Este teste pode ser realizado em laboratório, colhendo uma amostra de sangue do paciente. Existem dois tipos de teste ELISA: ELISA direto e ELISA indireto. A principal diferença entre ELISA direto e indireto é que ELISA indireto é mais sensível e requer a adição de um anticorpo secundário enquanto ELISA direto é menos sensível e usa apenas um anticorpo primário.

CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é o ELISA direto
3. O que é ELISA Indireto
4. Comparação lado a lado - ELISA direto vs indireto
5. Resumo

O que é o Direct ELISA?

ELISA é um teste de diagnóstico de doença realizado para identificar a presença de antígenos ou anticorpos específicos no sangue. É feito como um ensaio de placa. Ele usa anticorpos ligados a enzimas facilmente testadas. A presença de antígenos na amostra de soro se liga a anticorpos específicos ligados a enzimas. Na etapa final, um substrato específico é adicionado para reagir com a enzima. A enzima converte o substrato em um produto colorido ou produtor de sinal. A mudança de cor no substrato químico revela a presença de um anticorpo específico na amostra de soro. O teste ELISA direto usa apenas um anticorpo primário ligado à enzima. Ao se ligar ao antígeno, ele muda rapidamente a cor, indicando a presença do agente infeccioso no sangue. No entanto, a intensidade dos sinais é mais fraca no ELISA direto, uma vez que os epítopos estão limitados à ligação dos antígenos. Portanto, o ELISA direto é menos sensível em comparação com o ELISA indireto.

Figura 01: Teste direto ELISA

O que é ELISA indireto?

O ELISA pode ser realizado usando dois tipos de anticorpos, a saber; anticorpo primário e anticorpo secundário. A ferramenta ELISA indireta usa os dois tipos de anticorpos para amplificar os sinais para uma melhor detecção. A técnica indireta de ELISA é realizada da seguinte maneira.

1. As placas são incubadas com antígenos e lavadas para bloquear a ligação não específica.
2. Em seguida, os anticorpos primários são adicionados e lavados.
3. Anticorpo secundário ligado a enzima é adicionado e lavado.
4. Um substrato é adicionado e deixado reagir com enzimas.
5. Os sinais são detectados e a presença ou ausência do antígeno específico na amostra é identificada.

No teste ELISA indireto, vários anticorpos secundários podem se ligar a um único anticorpo primário. Os anticorpos secundários estão ligados a enzimas facilmente testadas. Portanto, uma ligação pode gerar um sinal forte devido a mais de uma interação. Portanto, o ELISA indireto é mais sensível que o ELISA direto. No entanto, o ELISA indireto pode gerar sinais inespecíficos devido a reações cruzadas dos anticorpos secundários.

Figura 02: Teste ELISA indireto

Qual é a diferença entre ELISA direto e indireto?

ELISA direto vs indireto
O ELISA direto é menos sensível em comparação com o ELISA indireto.	ELISA indireto é mais sensível.
Tempo gasto
O teste ELISA direto é um processo rápido.	O ELISA indireto consome muito tempo.
Uso de Anticorpos
Apenas um tipo de anticorpos (anticorpos primários) é usado no ELISA direto.	Anticorpos primários e secundários são usados ​​para ELISA indireto.
Vincular com enzimas
Os anticorpos primários estão ligados a enzimas.	Anticorpos secundários estão ligados a enzimas.
Reatividade cruzada de segundos anticorpos
O ELISA direto elimina a reatividade cruzada de segundos anticorpos.	ELISA indireto é afetado com reatividade cruzada de segundos anticorpos.
Signals
Os sinais são fracos em comparação com o ELISA indireto.	Os sinais são amplificados no ELISA indireto. Por isso, é fácil detectar.

Resumo - ELISA Direto vs Indireto

O ELISA é uma técnica bioquímica usada principalmente em imunologia para detectar a presença de um anticorpo ou antígeno na amostra de sangue de um paciente. Pode ser realizado através de dois processos conhecidos como ELISA direto ou indireto. O teste ELISA direto usa apenas anticorpos primários para detectar o antígeno, enquanto o ELISA indireto usa anticorpos primários e secundários. No ELISA direto, os anticorpos primários são marcados, enquanto no ELISA indireto os anticorpos secundários são marcados. Essa é a diferença entre ELISA direto e indireto.

Referências
1. ”O ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA).” Boletim da Organização Mundial da Saúde. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29 Mar. 2017
2. Loon, A.M van, J.T. Van Der Logt, F.W. Heessen e J. Van Der Veen. "Ensaio imunossorvente ligado a enzima que usa antígeno marcado para detecção de anticorpos das imunoglobulinas M e A em toxoplasmose: comparação com imunofluorescência indireta e ensaio imunoabsorvente ligado a enzima de sanduíche duplo". Jornal de Microbiologia Clínica. Biblioteca Nacional de Medicina dos EUA, junho de 1983. Web. 29 Mar. 2017

Cortesia da imagem:
1. “ELISA diagram” Por Cavitri - Trabalho próprio (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia 
2. "ELISA Indireto" Por Cawang - Trabalho próprio (CC0) via Commons Wikimedia