Diferença entre tripsinização quente e fria

Diferença de chave - Warm vs Frio Tripsinização
 

A tripsinização a quente e a frio são dois métodos utilizados na desagregação enzimática de células na cultura de células animais. o diferença chave entre a tripsinização quente e a frio, como os nomes sugerem, depende da temperatura na qual a tripsina é adicionada para desagregação celular. A tripsinização a quente ocorre sob condições de temperatura mais alta (36,5 - 37 ^{0 0}C) Considerando que a tripsinização a frio ocorre em condições de baixa temperatura.

Durante o processo de cultura celular primária de células animais, existem três métodos principais utilizados e provaram ser bem sucedidos. Os três métodos incluem desagregação mecânica de células, desagregação enzimática de células e a técnica de explante primário. A desagregação enzimática das células levando ao isolamento das células e é realizada pela enzima tripsina de degradação de proteínas. Portanto, esse processo é conhecido como tripsinização. A tripsinização pode ser feita sob duas condições diferentes, a saber, Tripsinização a Quente e Tripsinização a Frio. A tripsinização a quente é o método de tratamento das células com tripsina em condições quentes a uma temperatura de 36,5 - 37 ^{0 0}C. Tripsinização a frio é o processo de tratamento com tripsina que ocorre em condições mais frias, de preferência no gelo, mantendo temperaturas muito baixas.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é tripsinização a quente
3. O que é tripsinização a frio
4. Semelhanças entre tripsinização quente e fria
5. Comparação lado a lado - tripsinização a quente e fria em forma de tabela
6. Resumo

O que é tripsinização quente?

A tripsinização pode ser feita para desagregar os componentes celulares, a fim de isolar as células para produzir uma cultura celular primária. A tripsina é uma enzima de degradação de proteínas, e a mistura enzimática usada na tripsinização pode ser um extrato bruto ou um produto purificado. Diz-se que o extrato bruto é mais eficiente na lise de proteínas e na desintegração celular, pois contém outras enzimas degradantes.

A tripsinização a quente é o método enzimático mais comumente usado para desagregação celular, que ocorre sob condições de temperatura mais alta. Antes do tratamento por tripsinização, o tecido desejado é cortado em pedaços menores. Facilita o processo fácil de desagregação. O tecido picado é então lavado em um meio especial conhecido como meio de sal de dissecção.

Após a conclusão da etapa de lavagem, as células são transformadas em um balão contendo a enzima ativa, que é a tripsina. Como esta técnica implica um protocolo de tripsinização quente, a tripsina é colocada a uma temperatura de cerca de 37 ^{0 0}C por cerca de quatro horas.

Figura 01: tripsina

O conteúdo é misturado e agitado usando métodos de centrifugação para facilitar o protocolo e acelerar o processo de desagregação. Uma vez atingido o tempo recomendado, as células podem ser derivadas do sobrenadante. As células derivadas do sobrenadante são então incubadas a uma temperatura e tempo específicos.

O que é tripsinização a frio?

Tripsinização a frio é o outro tipo de tripsinização que ocorre sob condições frias. Nesta técnica, as células que são cortadas e lavadas são colocadas em frascos no gelo e depois embebidas em tripsina. O período de imersão é muito maior - cerca de 6 a 24 horas.

Após a conclusão do procedimento de imersão, a tripsina é removida do lisado celular e os pedaços de tecido são incubados a 37 ^{0 0}C por cerca de 20 a 30 minutos. A desagregação das células é provocada por pipetagem repetida da mistura de tecidos. Isso permitirá que as células se dissociem da membrana e cheguem ao sobrenadante. Quando as células estão no sobrenadante, elas são incubadas e crescidas na temperatura e no período de tempo desejados..

O método de tripsinização a frio tem várias vantagens

• Maior rendimento de células viáveis, pois o dano celular é minimizado. O dano celular é minimizado por não se usar etapas de centrifugação.
• Método altamente conveniente.
• Menos trabalhoso.

A principal limitação do método de tripsinização a frio é que grandes quantidades não podem ser usadas em uma instância.

Quais são as semelhanças entre tripsinização a quente e a frio?

• Os processos de tripsinização a quente e a frio usam a enzima tripsina para desagregação das células.
• Os processos de tripsinização a quente e a frio são usados ​​em procedimentos de cultura de células para a desagregação de células.
• Nos procedimentos de tratamento por tripsinização a quente e a frio, as células são derivadas do sobrenadante.

Qual é a diferença entre tripsinização a quente e a frio?

Trypsinization morno contra frio
A tripsinização a quente é o método de tratamento das células com tripsina em condições quentes a uma temperatura de 36,5 - 37 0 0.	Tripsinização a frio é o processo de tratamento com tripsina que ocorre em condições mais frias, de preferência no gelo, mantendo temperaturas muito baixas.
Protocolo
Os pedaços de tecido picado são mantidos em 37 0 0C continuamente durante todo o procedimento.	Os pedaços de tecido picado são inicialmente mantidos em temperaturas geladas e depois mantidos em 37 0 0.
Temperatura
A tripsinização a quente ocorre entre 36,5 e 37 0 0	A tripsinização a frio ocorre a temperaturas muito baixas.
Tempo consumido
Menor tempo necessário para todo o processo (cerca de 4 horas) de tripsinização a quente.	Maior tempo necessário (cerca de 6 a 24 horas) para tripsinização a frio.
Rendimento de células viáveis
Baixo nível de tripsinização a quente.	Alto nível de tripsinização a frio.
Uso de Centrifugação
A centrifugação é necessária para a desagregação das células na tripsinização quente.	A centrifugação não é necessária na tripsinização a frio.
Quantidade inicial de tecido para tripsinização
Uma quantidade maior de tecido pode ser usada na tripsinização quente.	Uma quantidade menor de tecido pode ser usada na tripsinização a frio.
Danos celulares
Alto devido à centrifugação na tripsinização quente.	Menos devido à tripsinização a frio.

Sumário - Warm vs Frio Tripsinização

A tripsinização é o método de usar a enzima tripsina de degradação de proteínas para a desagregação e preparação de culturas celulares primárias durante o processo de cultura celular. Existem duas técnicas principais de tripsinização com base nas temperaturas usadas durante o procedimento. São tripsinização quente e fria. A tripsinização a quente é realizada a 37 ^{0 0}C enquanto a tripsinização a frio é realizada sob condições geladas. Embora a tripsinização a frio leve mais tempo para ser concluída, diz-se que ela possui um maior rendimento de células viáveis. Isso se deve ao fato de que o dano celular é minimizado na tripsinização a frio, pois não utiliza etapas vigorosas de centrifugação. Esta é a diferença entre tripsinização quente e fria.

Referência:

1. "tripsinização". Tripsinização - uma visão geral | Tópicos do ScienceDirect. Disponivel aqui 
2. "Cultura celular primária: 3 técnicas (com diagrama)." Biology Discussion, 16 de outubro de 2015. Disponível aqui  

Cortesia da imagem:

1. 'Site ativo de tripsina' Por Fdardel - Trabalho próprio, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia