Diferença entre RP HPLC e HIC

o diferença chave entre RP HPLC e HIC é que A RP HPLC utiliza uma fase móvel mais polar e uma fase estacionária menos polar. Visto que o HIC usa uma fase estacionária hidrofóbica que permite que as moléculas hidrofóbicas se liguem a ela.

A cromatografia é uma técnica analítica que ajuda a separar uma mistura em seus componentes. Primeiro, temos que dissolver a amostra para ser separada em uma solução. Essa mistura solução-substância é chamada de fase móvel. Então a fase móvel é passada através de outro material chamado fase estacionária. A fase estacionária determina a separação dos componentes. A separação ocorre devido à partição do material entre a fase móvel e a fase estacionária.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é RP HPLC
3. O que é HIC
4. Comparação lado a lado - RP HPLC vs. HIC em forma de tabela
5. Resumo

O que é RP HPLC?

O termo RP HPLC significa Cromatografia Líquida de Alto Desempenho e Fase Reversa. Envolve a separação de componentes em uma mistura, de acordo com a hidrofobicidade. Os componentes hidrofóbicos na fase móvel se ligam aos ligantes hidrofóbicos imobilizados na fase estacionária, enquanto os componentes hidrofílicos passam pela fase estacionária sem se fixar à superfície da fase estacionária.

Figura 01: Aparelho para HPLC

Além disso, esse método tem mais reprodutibilidade em comparação com outras técnicas cromatográficas e mostra ampla aplicabilidade também. Portanto, usamos esse método em laboratórios para mais de 75% de todos os métodos de HPLC. Na maioria das vezes, usamos uma mistura aquosa de água com um solvente orgânico polar miscível como fase móvel. Assim, garantirá a fixação dos componentes hidrofóbicos na solução à superfície da fase estacionária.

O que é HIC?

O termo HIC significa Cromatografia de interação hidrofóbica. É um tipo de HPLC de fase reversa, e esse método é usado principalmente para a separação de grandes biomoléculas, como proteínas. Neste método, precisamos usar um meio aquoso para fazer a amostra da biomolécula. É porque os solventes orgânicos podem causar desnaturação das proteínas. Além disso, esta técnica utiliza a interação entre grandes moléculas com uma superfície levemente hidrofóbica da fase estacionária. Além disso, temos que usar uma alta concentração de sal na amostra, porque incentiva a retenção da proteína na embalagem; esse processo é chamado de salgar. Ao diminuir gradualmente a concentração de sal, podemos fazer com que as biomoléculas eluam separadamente, de acordo com sua hidrofobicidade.

Normalmente, este método usa as condições opostas às da cromatografia de troca iônica. Nesta técnica, primeiro, precisamos passar uma solução tampão pela coluna para reduzir a solvatação do soluto na amostra. Faz com que as regiões hidrofóbicas da proteína se exponham. No entanto, quando a molécula é mais hidrofóbica, é necessário menos sal para promover a ligação. Aqui, os solutos menos hidrofóbicos são eluídos primeiro e, de acordo com a mudança na concentração de sal, solutos mais hidrofóbicos são eluídos por último.

Qual é a diferença entre RP HPLC e HIC?

A cromatografia é uma técnica analítica para a separação de componentes em uma mistura. RP HPLC e HIC são duas técnicas cromatográficas especializadas. A principal diferença entre o RP HPLC e o HIC é que o RP HPLC usa uma fase móvel mais polar e menos fase estacionária polar, enquanto o HIC usa uma fase estacionária hidrofóbica, que permite que as moléculas hidrofóbicas se liguem a ela.

O infográfico abaixo resume a diferença entre RP HPLC e HIC.

Resumo - RP HPLC vs. HIC

A cromatografia é uma técnica analítica para a separação de componentes em uma mistura. RP HPLC e HIC são duas técnicas cromatográficas especializadas. A principal diferença entre o RP HPLC e o HIC é que o RP HPLC usa uma fase móvel mais polar e uma fase estacionária menos polar, enquanto o HIC usa uma fase estacionária hidrofóbica, que permite que as moléculas hidrofóbicas se liguem a ela.

Referência:

1. "Modos de separação por HPLC". Águas, disponível aqui.

Cortesia da imagem:

1. “HPLC preparativa” por GYassineMrabetTalk & # x2709; Esta imagem vetorial não especificada em W3C foi criada com o Inkscape. - Trabalho próprio (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia