Diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal

o diferença chave entre a fase reversa e a HPLC em fase normal é que o HPLC de fase reversa usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel menos polar, enquanto a HPLC de fase normal usa uma fase estacionária não polar e uma fase móvel polar.

A HPLC de fase normal é a técnica mais antiga de HPLC usada por Tswett em suas separações de extratos vegetais; ele usou giz em uma coluna de vidro. Esse foi o modo clássico de cromatografia que levou a nomeá-lo como a técnica "normal". A HPLC de fase reversa, por outro lado, é o oposto da técnica normal, que os cientistas desenvolveram recentemente.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é HPLC de fase reversa
3. O que é HPLC de fase normal
4. Comparação lado a lado - HPLC de fase reversa versus fase normal em forma de tabela
5. Resumo

O que é HPLC de fase reversa?

A HPLC de fase reversa é uma técnica cromatográfica na qual usamos uma fase estacionária hidrofóbica. Entre todos os métodos de HPLC, usamos esse método para aproximadamente 70% devido à sua ampla aplicabilidade e reprodutibilidade. A fase estacionária é não polar e a fase móvel é polar.

Na maioria das vezes, os cientistas usam uma mistura aquosa de água com um solvente orgânico polar miscível, como acetonitrila ou metanol, como fase móvel. Portanto, os analitos interagem com a fase estacionária não polar.

O que é HPLC de fase normal?

HPLC de fase normal é uma técnica cromatográfica na qual usamos uma fase estacionária hidrofílica. É o método tradicional de HPLC, embora não o utilizemos tanto. A fase estacionária é polar e a fase móvel é não polar. Mais importante, a fase móvel dessa técnica é 100% orgânica. Isso significa que nenhuma água é usada para isso.

Figura 01: Um perfil de amostra para cromatogramas de HPLC em fase normal e reversa, de acordo com a polaridade dos componentes no analito.

Normalmente, a fase estacionária contém sílica, ciano, diol, fases ligadas a amino, etc. As fases móveis incluem solventes orgânicos como hexano, acetato de etila, etc. Essa técnica baseia-se na retenção de moléculas de solvente ou analito na fase estacionária polar.

Qual é a diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal?

A HPLC de fase reversa é uma técnica cromatográfica na qual usamos uma fase estacionária hidrofóbica. A fase estacionária dessa técnica é não polar. A fase estacionária é não polar, enquanto a fase móvel é polar. Além disso, os cientistas usam uma mistura aquosa de água com um solvente orgânico polar miscível, como acetonitrila ou metanol, como a fase móvel na HPLC de fase reversa. Considerando que, a fase normal de HPLC é uma técnica cromatográfica na qual usamos uma fase estacionária hidrofílica. A fase estacionária dessa técnica é polar. A fase estacionária é polar enquanto a fase móvel é não polar. Além disso, os cientistas usam solventes orgânicos como hexano, acetato de etila etc. como a fase móvel da HPLC em fase normal. O infográfico abaixo apresenta a diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal em forma de tabela.

Resumo - HPLC de fase reversa versus fase normal

As técnicas de HPLC de fase reversa e de fase normal são duas técnicas cromatográficas líquidas. A diferença entre HPLC de fase reversa e fase normal é que o HPLC de fase reversa usa uma fase estacionária polar e uma fase móvel menos polar, enquanto o HPLC de fase normal usa uma fase estacionária não polar e uma fase móvel polar.

Referência:

1. Águas. "Modos de separação por HPLC". HPLC - Cromatografia Líquida de Alto Desempenho Explicada: Waters. Disponivel aqui