Diferença entre Phusion e Taq Polymerase

Diferença de chave - Phusion vs Taq Polimerase
 

As polimerases de DNA são enzimas amplamente usadas em técnicas de biologia molecular e também estão naturalmente presentes em todos os organismos que sofrem replicação de DNA. São as principais enzimas polimerizadoras que envolvem durante a replicação. A polimerase de DNA é capaz de adicionar nucleotídeos à extremidade 3 'livre da fita de DNA, causando a extensão de uma nova fita. Atualmente, devido aos desenvolvimentos da biologia molecular em diagnóstico de doenças e aplicações industriais, é importante fabricar polimerases com várias propriedades benéficas. Isso aumenta a precisão do método e o torna uma técnica mais rápida. Phusion e Taq polimerase são duas enzimas polimerase termoestáveis ​​produzidas comercialmente que são usadas em aplicações moleculares especiais. Phusion é uma polimerase de DNA isolada de Pyrococcus furiosus e é usado principalmente em experimentos de clonagem para aumentar a fidelidade. Taq DNA Polymerase é a DNA polimerase padrão usada na reação em cadeia da polimerase (PCR) e é isolada da bactéria termoestável; Thermus aquaticus. o diferença chave entre as duas enzimas é o microrganismo fonte. A fusão é isolada do extremófilo, Pyrococcus furiosus Considerando que a polimerase Taq é isolada do termófilo, Thermus aquaticus.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é Phusion
3. O que é Taq Polymerase
4. Semelhanças entre Phusion e Taq Polymerase
5. Comparação lado a lado - Phusion vs Taq Polymerase em forma de tabela
6. Resumo

O que é Phusion?

DNA polimerase por fusão é uma nova polimerase que é fabricada isolando a enzima de Pyrococcus furiosus, que é uma arquéia extremofílica. Esses micróbios residem em condições de temperatura extremamente alta, tornando a polimerase uma polimerase altamente estável ao calor. A polimerase por fusão é usada para obter extrema fidelidade sobre a polimerase termoestável convencional; Polimerase Taq. A polimerase por fusão é capaz de amplificar modelos longos até 7,5 kb de DNA genômico. A capacidade ótima de polimerização da polimerase Phusion é de 72^{0 0} C. Phusion também é usado em produtos de clonagem para sequenciamento, análise de expressão e análise de mutação.

A polimerase do DNA de fusão possui a atividade de exonuclease 3 '- 5'. Isso permite a revisão da fita recém-sintetizada após a síntese. Portanto, as incompatibilidades de nucleotídeos são facilmente reparadas. Assim, tem uma menor taxa de erro. As vantagens gerais da polimerase Phusion são;

• Extrema Fidelidade
• Alta velocidade e tempo de extensão reduzido
• Reações robustas e requer otimização mínima
• Alto rendimento

Figura 01: Phusion

A principal desvantagem da polimerase de Phusion é que ela é inibida na presença de trifosfato de desoxiuridina (dUTP). Quando os dUTPs são acumulados na mistura de reação, isso pode inibir as ações da polimerase de Phusion. Isto é evitado tratando a mistura de reação com dUTPase antes de adicionar a enzima. Atualmente, uma variante resistente à dUTP da polimerase Phusion conhecida como Pfu Turbo é usada em vez da polimerase Phusion como um remédio para esse problema.

O que é Taq Polymerase?

Taq DNA polimerase A invenção revolucionou o campo da biologia molecular. Ele resolveu um grande problema na amplificação de DNA. A polimerase de DNA Taq é uma enzima polimerase estável ao calor, extraída e isolada da bactéria termofílica, Thermus aquaticus. A descoberta dessas enzimas leva ao desenvolvimento da PCR. Esta enzima permitiu o uso da reação em cadeia da polimerase na amplificação do DNA em vez das técnicas de clonagem laboriosas convencionais. A PCR agora é usada em diagnósticos moleculares, campos agrícolas e industriais, com muitas novas variações adicionadas à técnica.

Figura 02: Taq polimerase

A polimerase de DNA Taq funciona na faixa ideal de temperatura entre 72^{0 0}C - 80^{0 0}C. A polimerase de DNA Taq requer um co-fator; magnésio por sua função. A polimerase Taq não possui a capacidade de revisão de 3 '- 5'; portanto, a taxa de erro da polimerase de DNA Taq é alta em comparação com os tipos mais recentes de polimerases de DNA, como a polimerase de Phusion etc. Mas, a popularidade da polimerase de DNA Taq permanece o mesmo em todo o mundo da ciência devido à conveniência e flexibilidade da enzima.

Quais são as semelhanças entre Phusion e Taq polimerase?

• As enzimas Phusion e Taq polimerase são enzimas polimerizadoras capazes de adicionar nucleotídeos à extremidade livre de 3 'da fita de DNA.
• As polimerases Phusion e Taq requerem uma sequência de primers para iniciar a polimerização.
• As polimerases Phusion e Taq são estáveis ​​ao calor.
• As polimerases Phusion e Taq são usadas em mecanismos de PCR para amplificar o DNA.
• Ao adicionar a polimerase à mistura da reação, as polimerases Phusion e Taq são adicionadas por último para garantir a eficiência da enzima.
• As polimerases Phusion e Taq são sintetizadas comercialmente para fins experimentais de biologia molecular.
• As polimerases Phusion e Taq requerem um cofator para concluir sua função.

Qual é a diferença entre Phusion e Taq Polymerase?

Phusion vs Taq Polymerase
Phusion é uma polimerase de DNA isolada de Pyrococcus furiosus e é usado principalmente em experimentos de clonagem para aumentar a fidelidade.	Taq DNA Polymerase é a DNA polimerase padrão usada na reação em cadeia da polimerase (PCR) e é isolada da bactéria termoestável, Thermus aquaticus.
Organismo de origem
A fusão é extraída da archaea extremofílica - Pyrococcus furiosus.	Essas obras literárias vão do período da colonização ao período da descolonização.
Capacidade de prova de leitura
A capacidade de leitura à prova de 3 '- 5' está presente no Phusion.	A capacidade de leitura à prova de 3 '- 5' está ausente na polimerase Taq.
Fidelidade
Existe alta fidelidade com o Phusion.	A polimerase Taq mostra baixa fidelidade.
Amplificação
Phusion é capaz de amplificar longos fragmentos de DNA.	A polimerase Taq é capaz de amplificar fragmentos de DNA muito mais curtos.
Envenenamento por dUTP
A ação da fusão é inibida pela acumulação ímpar.	A polimerase Taq não é inibida pelo dUPT.

Sumário - Phusion vs Taq polimerase

Phusion e Taq DNA polimerase são duas polimerases estáveis ​​ao calor que são usadas em técnicas de PCR. A fusão é uma polimerase isolada do extremófilo, Pyrococcus furiosus considerando que o Taq é isolado das bactérias termoestáveis Thermus aquaticus. A descoberta da polimerase de DNA Taq leva à invenção da PCR. O Phusion tem muitas vantagens sobre o Taq, o que o tornou uma opção melhor na produção de DNA de alta fidelidade. No entanto, a Taq polimerase ainda é usada como a enzima polimerase padrão na PCR. Esta é a diferença entre a polimerase Phusion e Taq.

Referência:

1.Biolabs, Nova Inglaterra. "Taq DNA Polymerases." New England Biolabs: Reagentes para a Indústria de Ciências da Vida. Disponivel aqui  
2. "Phusion DNA Polymerase". Biolabs da Nova Inglaterra. Disponivel aqui 

Cortesia da imagem:

1.'GAM ilustrado por Nivin Nasri'By NivinN - Obra própria, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia  
2.'Taq'By Adenosine - Obra própria, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia