Diferença entre hibridização in situ e imuno-histoquímica

Diferença chave - Hibridização in situ vs imuno-histoquímica
 

O diagnóstico de câncer e doenças infecciosas é uma tendência popular em que novas técnicas baseadas em proteômica e genômica são utilizadas com o objetivo de identificar tumores ou células infecciosas, sua proliferação e os locais de desenvolvimento celular e analisar a base genética da maioria das doenças transmissíveis e não transmissíveis. Isso resultará no processamento e design de medicamentos precisos e no desenvolvimento de terapias personalizadas para doenças. A hibridização in situ (ISH) e a imuno-histoquímica (IHC) são duas dessas técnicas amplamente utilizadas na biologia do câncer e a principal diferença entre hibridação in situ e imunoquímica está nas moléculas usadas no procedimento de análise. Na ISH, as sondas de ácido nucleico são usadas na análise, enquanto na IHC são utilizados anticorpos monoclonais e policlonais para as determinações diagnósticas..

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é hibridização in situ
3. O que é imuno-histoquímica
4. Semelhanças entre hibridização in situ e imuno-histoquímica
5. Comparação lado a lado - hibridização in situ versus imuno-histoquímica em forma de tabela
6. Resumo

O que é hibridização in situ (ISH)?

A hibridação in situ é uma técnica de hibridação de ácido nucleico que é realizada diretamente em uma porção ou seção de tecido, em todo o tecido ou nas células. A técnica depende da teoria do emparelhamento de bases complementares do Watson Crick, resultando em híbridos DNA-DNA ou híbridos DNA-RNA que podem detectar genes mutados ou identificar o gene de interesse necessário. Sequências de DNA de fita simples, sequências de DNA de fita dupla, sequências de RNA de fita simples ou sequências de oligonucleotídeos sintéticos são usadas como sondas durante a técnica de hibridação, e essas sondas são marcadas com fósforo radioativo na extremidade 5 'para procedimentos de identificação após autoradiografia ou marcadas com corantes fluorescentes. . Existem diferentes tipos de técnicas ISH disponíveis com base no tipo de sonda usada e no tipo de técnica de visualização seguida.

Figura 01: Hibridização fluorescente in situ

Existem muitas aplicações de ISH, principalmente no diagnóstico molecular de doenças infecciosas, a fim de identificar a presença de patógenos e confirmar o patógeno através de diagnósticos moleculares. Também é usado nos campos da biologia do desenvolvimento, cariotipagem e análise filogenética e mapeamento físico de cromossomos.

O que é imuno-histoquímica (IHC)?

Na técnica de IHC, a principal molécula analisada é o antígeno. Durante o IHC, são utilizados anticorpos monoclonais e policlonais para determinar a presença de antígenos na infecção ou no estado de proliferação celular maligna. A técnica é baseada na ligação antígeno-anticorpo, e rótulos enzimáticos são usados ​​para essa técnica; uma dessas aplicações é o ELISA (ensaio imunossorvente ligado a enzima). Os marcadores também podem ser anticorpos marcados com fluorescência ou anticorpos marcados por rádio.

Figura 02: Imuno-histoquímica

O IHC é amplamente utilizado para detecção de células cancerígenas. Os procedimentos de diagnóstico têm como alvo os antígenos presentes nas células tumorais para identificar e caracterizar o tumor. O mesmo procedimento é incorporado para diagnosticar agentes infecciosos. Anticorpos monoclonais e policlonais também são usados ​​para analisar diferentes produtos gênicos, permitindo a reação de ligação anticorpo-antígeno entre a proteína desejada e o anticorpo sintético administrado.

Quais são as semelhanças entre hibridização in situ e imuno-histoquímica?

• ISH e IHC são reações altamente específicas.
• Ambas as técnicas são altamente precisas.
• Ambas as técnicas podem ser usadas no diagnóstico de câncer e doenças infecciosas.
• Essas técnicas são realizadas em ambientes estéreis in vitro.
• Ambas são técnicas rápidas que fornecem resultados reproduzíveis.
• ISH e IHC usam métodos de detecção como rotulagem por rádio e técnicas de fluorescência.

Qual é a diferença entre hibridização in situ e imuno-histoquímica?

Hibridização In Situ vs Imuno-histoquímica
ISH é uma técnica de hibridação de ácido nucleico que é realizada diretamente em uma porção ou seção de tecido ou em todo o tecido.	IHC é uma técnica em que os anticorpos monoclonais e policlonais são utilizados para determinar a presença de antígenos, que são marcadores especiais de proteínas colocados nas superfícies celulares.
Tipo de Bio Moléculas Analisadas
ISH analisa ácidos nucleicos.	IHC analisa proteínas-antígenos.
Base da reação bioquímica
O emparelhamento de bases complementares entre DNA-DNA ou DNA-RNA ocorre nesta técnica.	As interações antígeno-anticorpo estão envolvidas na imuno-histoquímica.
Métodos de detecção ligados a enzimas
Métodos de detecção ligados a enzimas não podem ser usados ​​no ISH.	Métodos de detecção ligados a enzimas podem ser usados ​​no IHC.

Resumo - Hibridização In Situ vs Imuno-histoquímica

Os diagnósticos moleculares são métodos rápidos e confirmatórios que podem ser utilizados para identificar uma doença não transmissível, como câncer ou doença transmissível, como HIV ou tuberculose, com base nos marcadores moleculares presentes nas células que levam à manifestação da doença. Marcadores moleculares podem estar presentes na forma de proteínas expressas ou no nível genético, com base nas quais novas técnicas são introduzidas para aumentar a eficiência e são menos trabalhosas, embora exista um alto custo envolvido com essas técnicas. Assim, o ISH depende da formação de híbridos DNA-DNA ou DNA-RNA, e o IHC depende das reações específicas entre anticorpo e antígeno. Esta é a diferença entre hibridação in situ.

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Referências:

1. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Aplicações de imuno-histoquímica." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Publicações Medknow & Media Pvt Ltd, agosto de 2012, disponível aqui. Acessado em 24 de agosto de 2017.
2. "Hibridização In Situ (ISH)". National Center for Biotechnology Information, Biblioteca Nacional de Medicina dos EUA, disponível aqui. Acessado em 24 de agosto de 2017.

Cortesia da imagem:

1. “FISH (Hibridização Fluorescente In Situ)” Por MrMatze - Trabalho próprio (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. “Immunohistochemicalstaining2” Por Imoen no idioma inglês Wikipedia (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia