Diferença entre GFP e EGFP

o diferença chave entre GFP e EGFP é que o GFP é uma proteína de tipo selvagem incorporada na clonagem molecular de células não de mamíferos, enquanto o EGFP é um tipo de GFP aprimorado ou modificado que pode ser usado em células de mamíferos.

A clonagem molecular é uma técnica avançada que os cientistas usam imensamente na expressão de proteínas por meio de tecnologia recombinante. Na tecnologia do DNA recombinante, é necessário transformar o vetor recombinante com sucesso no organismo hospedeiro. Portanto, durante o processo de transformação, deve-se identificar e confirmar se o gene de interesse foi transformado ou não no hospedeiro. Para avaliar isso, os biólogos moleculares adotam várias técnicas. Fora dessas técnicas, uma é o gene repórter. Esses genes repórter atuam como marcadores selecionáveis ​​para selecionar os transformantes corretos. Assim, a proteína verde fluorescente (GFP) e a proteína verde fluorescente aprimorada (EGFP) são duas proteínas repórteres usadas na clonagem molecular.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é GFP
3. O que é EGFP
4. Semelhanças entre GFP e EGFP
5. Comparação lado a lado - GFP vs EGFP em forma de tabela
6. Resumo

O que é GFP?

A GFP é uma proteína de tipo selvagem que contém 238 resíduos de aminoácidos e várias regiões selecionáveis ​​de sequências de aminoácidos que a distinguem das outras proteínas fluorescentes. Além disso, esta proteína de tipo selvagem estava originalmente isolada de Aequorea Victoria; um tipo de água-viva. No entanto, em fenômenos naturais, a água-viva foi capaz de produzir fluorescência de cor verde em resposta a certos estímulos..

Anteriormente, esse conceito surpreendeu os cientistas e eles decidiram usá-lo em suas tecnologias de DNA recombinante. Consequentemente, os cientistas usaram essa forma mutante do gene do tipo selvagem como um gene repórter em seus estudos de expressão gênica. O gene do tipo selvagem da GFP é capaz de produzir uma proteína que fornece fluorescência à temperatura ambiente ou sob luz UV. Portanto, quando inserido nos transformantes, ele expressa e produz fluorescência. Se a fluorescência resultar após o processo de transformação, confirma o sucesso do processo de transformação. Em palavras simples, a emissão de fluorescência sinaliza a transformação bem-sucedida do vetor que transporta o gene de interesse para o hospedeiro.

Figura 01: GFP

Por esse motivo, o GFP atua como um na Vivo marcador de expressão gênica. Atualmente, técnicas de engenharia genética estão em uso para produzir GFP. Além disso, muitas versões aprimoradas do GFP, como o EGFP, estão disponíveis. Portanto, isso permite o uso eficiente da GFP em estudos de clonagem molecular e expressão gênica.

O que é EGFP?

A proteína fluorescente verde aprimorada ou EGFP é uma versão aprimorada da GFP. Em palavras simples, podemos definir o EGFP como uma versão projetada do GFP do tipo selvagem. Quando o gene do tipo selvagem da GFP sofre mutação, produz efeitos benéficos. Portanto, o gene mutado da GFP permite a expressão de novos caracteres e, como resultado disso, podemos produzir a GFP aprimorada com características aprimoradas. Além disso, podemos introduzir mutações com sucesso no gene GFP do tipo selvagem usando métodos químicos ou de irradiação. Esses genes mutados produzem o EGFP, que tem características mais benéficas.

Figura 02: EGFP

As características melhoradas do EGFP são as seguintes;

• Capaz de emitir sinais de fluorescência mais fortes.
• Tem alta sensibilidade.
• Pode usá-lo em células de mamíferos em vez de procariontes e outros eucariontes de nível inferior.
• Além disso, fornece maior pureza do produto.

Portanto, em comparação ao GFP, o EGFP é a escolha preferida para estudos de expressão gênica. No entanto, o produto é mais caro em comparação ao GFP.

Quais são as semelhanças entre GFP e EGFP?

• GFP e EGFP são duas proteínas que têm a capacidade de emitir cor verde
• Portanto, ambos funcionam como proteínas repórteres em estudos de expressão gênica.
• Além disso, é possível sintetizar ambos usando a tecnologia de DNA recombinante.
• Além disso, é fácil alterar ainda mais esses dois tipos para sintetizar formas aprimoradas.

Qual é a diferença entre GFP e EGFP?

O gene repórter é um gene que se liga ao gene de interesse na tecnologia de DNA recombinante. Sinaliza a transformação bem-sucedida do vetor recombinante no hospedeiro. Aqui, GFP e EGFP são dois tipos de proteínas verdes fluorescentes que funcionam como proteínas repórteres. No entanto, a principal diferença entre GFP e EGFP é que o GFP é do tipo selvagem, enquanto o EGFP é uma versão projetada do GFP. Além disso, o EGFP tem características mais benéficas que o GFP. Por exemplo, o EGFP produz luz fluorescente mais forte e é mais sensível que o GFP. Outra diferença entre GFP e EGFP são os sistemas nos quais podemos usá-los. Sistemas não mamíferos usam GFP, enquanto sistemas mamíferos usam EGFP.

O infográfico abaixo apresenta a diferença entre GFP e EGFP em forma de tabela.

Resumo - GFP vs EGFP

GFP e EGFP são proteínas repórteres em estudos de clonagem molecular e expressão gênica. GFP é a proteína do tipo selvagem, que é uma proteína verde fluorescente. A proteína estava inicialmente isolada da água-viva Aequorea victoria. Em contraste, o EFGP é uma forma aprimorada de proteína GFP. É um mutante do tipo selvagem com características melhoradas. Portanto, o EFGP possui maior intensidade de sinal e maior sensibilidade. Portanto, podemos usá-lo em vetores de mamíferos. Por outro lado, o uso de GFP é principalmente apenas em vetores não mamíferos. No geral, esta é a diferença entre GFP e EGFP.

Referência:

1. Cinelli, RA, et al. “A proteína fluorescente verde aprimorada como ferramenta para a análise da dinâmica e localização das proteínas: estudo local de fluorescência no nível de molécula única.” Photochemistry and Photobiology., Biblioteca Nacional de Medicina dos EUA, junho de 2000. Disponível aqui  
2. “PDB101: Molécula do Mês: Proteína Fluorescente Verde (GFP).” RCSB: PDB-101. Disponivel aqui

Cortesia da imagem:

1. ”Filme de proteína fluorescente GFP” Por Erin Rod - Trabalho próprio, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 
2. ”CA2 amigo2 eGFP mouse” Por Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Obra própria, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia