Diferença entre citometria de fluxo e FACS

Diferença de chave - citometria de fluxo vs FACS

No contexto da teoria celular, as células são a unidade estrutural e funcional básica de todos os organismos vivos. A classificação celular é uma metodologia utilizada para separar células diferentes de acordo com as características fisiológicas e morfológicas. Eles podem ter características intracelulares ou extracelulares. A interação do DNA, RNA e proteínas são consideradas propriedades interativas intracelulares, enquanto a forma, tamanho e diferentes proteínas da superfície são consideradas propriedades extracelulares. Na ciência moderna, as metodologias de seleção de células levaram a auxiliar as diferentes investigações em estudos biológicos e também o estabelecimento de novos princípios por meio de pesquisas em medicina. A classificação celular é realizada em várias metodologias que incluem tanto primitivas com menos equipamentos quanto metodologias tecnológicas avançadas com o uso de máquinas sofisticadas. Citometria de fluxo, triagem de células ativadas por fluorescência (FACS), seleção de célula magnética e classificação de célula única são as principais metodologias utilizadas. A citometria de fluxo e o FACS são desenvolvidos para diferenciar as células de acordo com suas propriedades ópticas. FACS é um tipo especializado de citometria de fluxo. A citometria de fluxo é uma metodologia utilizada durante a análise de uma população heterogênea de células de acordo com diferentes moléculas de superfície celular, tamanho e volume, o que permite a investigação de células únicas. FACS é um processo pelo qual uma amostra de mistura de células é classificada de acordo com suas características de dispersão de luz e fluorescência em dois ou mais recipientes. Isto é o diferença chave entre citometria de fluxo e FACS.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é citometria de fluxo
3. O que é FACS
4. Semelhanças entre citometria de fluxo e FACS
5. Comparação lado a lado - citometria de fluxo versus FACS em forma de tabela
6. Resumo

O que é citometria de fluxo?

A citometria de fluxo é um método usado para examinar e determinar a expressão de moléculas intracelulares e a superfície celular e para definir e caracterizar tipos celulares distintos. Também é utilizado na determinação do volume e tamanho da célula e para avaliar a pureza das subpopulações que são isoladas. Isso permite a avaliação multiparâmetros de células únicas aproximadamente ao mesmo tempo. A citometria de fluxo é usada para medir a intensidade da fluorescência produzida devido a anticorpos marcados com fluorescência que ajudam a identificar proteínas ou ligantes que se ligam às células associadas.

Figura 01: Citometria de fluxo

Geralmente, a citometria de fluxo inclui principalmente três subsistemas. Eles são fluídicos, eletrônicos e ópticos. Na citometria de fluxo, estão disponíveis cinco componentes principais que são usados ​​na classificação de células. São elas: uma célula de fluxo (uma corrente de líquido usada para transportá-las e alinhar as células para o processo de detecção óptica), um sistema de medição (pode ser de diferentes sistemas, incluindo lâmpadas de mercúrio e xenônio, refrigerados a água de alta potência ou lasers refrigerados a ar ou de diodo), um ADC; Conversor analógico para digital, sistema de amplificação e computador para análise. A aquisição é o processo pelo qual os dados são coletados das amostras usando o citômetro de fluxo. Esse processo é mediado por um computador conectado ao citômetro de fluxo. O software presente no computador analisa as informações fornecidas ao computador a partir do citômetro de fluxo. O software também tem a capacidade de ajustar parâmetros do experimento que controla o citômetro de fluxo.

O que é FACS?

No contexto da citometria de fluxo, Classificação celular ativada por fluorescência (FACS) é um método utilizado na diferenciação e classificação de uma amostra de uma mistura de células biológicas. As células são separadas de dois ou mais contêineres. O método de classificação é baseado nas características físicas da célula, que incluem características de dispersão de luz e fluorescência da célula. Essa é uma técnica científica importante, que pode ser utilizada para obter resultados quantitativos e qualitativos confiáveis ​​dos sinais de fluorescência emitidos por cada célula. Durante o FACS, inicialmente, a mistura pré-obtida de células; uma suspensão é direcionada para o centro de uma corrente estreita de líquido que flui rapidamente. O fluxo de líquido é projetado para separar as células na suspensão com base no diâmetro de cada célula. Um mecanismo de vibração é aplicado ao fluxo de suspensão que resulta na formação de gotículas individuais.

Figura 02: FACS

O sistema é calibrado para criar uma única gota com uma célula. Imediatamente antes da formação de gotículas, a suspensão de fluxo se move ao longo de um aparelho de medição de fluorescência que detecta a característica de fluorescência de cada célula. No ponto de formação de gotículas, é colocado um anel de carga elétrica, cuja carga é induzida no anel antes da medição da intensidade da fluorescência. Uma vez que as gotículas são formadas a partir da corrente de suspensão, uma carga é retida dentro das gotículas que então entra em um sistema de deflexão eletrostática. De acordo com a carga, o sistema desvia as gotículas para diferentes recipientes. O método de aplicação da cobrança varia de acordo com os diferentes sistemas utilizados no FACS. O equipamento usado no FACS é conhecido como classificador de células ativado por fluorescência.

Qual é a semelhança entre citometria de fluxo e FACS?

• A citometria de fluxo e o FACS são desenvolvidos para diferenciar células de acordo com suas propriedades ópticas.

Qual é a diferença entre citometria de fluxo e FACS?

Citometria de fluxo vs FACS
A citometria de fluxo é uma metodologia utilizada durante a análise de uma população heterogênea de células de acordo com diferentes moléculas de superfície celular, tamanho e volume, o que permite a investigação de células únicas.	FACS é um processo pelo qual uma amostra de mistura de células é classificada de acordo com suas características de dispersão de luz e fluorescência em dois ou mais recipientes.

Resumo - Fluxo Citometria vs FACS

A célula é a unidade estrutural e funcional básica de todos os organismos vivos. A classificação celular é o processo pelo qual as células são isoladas e diferenciadas em diferentes categorias, com base em suas propriedades intracelulares e extracelulares. A citometria de fluxo e o FACS são duas metodologias importantes na classificação celular. Ambos os processos são desenvolvidos para diferenciar células de acordo com suas propriedades ópticas. A citometria de fluxo é uma metodologia utilizada durante a análise de uma população heterogênea de células de acordo com diferentes moléculas, tamanho e volume da superfície celular, o que permite a investigação de células únicas. FACS é um processo pelo qual uma mistura de células de amostra é classificada de acordo com suas características de dispersão de luz e fluorescência em dois ou mais recipientes. Essa é a diferença entre citometria de fluxo e FACS.

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Referência:

1. Citometria de fluxo (FCM) / FACS | Classificação celular ativada por fluorescência (FACS). Acessado em 22 de setembro de 2017. Disponível aqui
2. Ibrahim, Sherrif F. e Ger van den Engh. "Citometria de fluxo e classificação de células". SpringerLink, Springer, Berlin, Heidelberg, 1 de janeiro de 1970… Acessado em 22 de setembro de 2017. Disponível aqui

Cortesia da imagem:

1. 'Citômetro' Por Kierano - Obra própria, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. `` Classificação de células assistidas por fluorescência (FACS) '' Por SariSabban - Sabban, Sari (2011) Desenvolvimento de um sistema modelo in vitro para o estudo da interação da Equus caballus IgE com seu receptor FcεRI de alta afinidade (tese de doutorado), Universidade de Sheffield , (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia