Diferença entre imunofluorescência direta e indireta

o diferença chave entre a imunofluorescência direta e indireta é que o a imunofluorescência direta usa um único anticorpo que trabalha contra o alvo de interesse, enquanto a imunofluorescência indireta usa dois anticorpos para marcar o alvo de interesse.

A imunofluorescência ou imagem celular é uma técnica usada para marcar um antígeno alvo específico com um fluoróforo. Aqui, o fluoróforo é um composto químico fluorescente que pode reemitir luz mediante excitação da luz. Quando um fluoróforo se liga ao antígeno alvo, permite a detecção da molécula alvo na amostra. Para descrevê-lo ainda mais, quando um antígeno se liga a um anticorpo específico, ele pode ser conjugado com fluoróforos. Portanto, é fácil detectar a presença do antígeno alvo na amostra ao observar ao microscópio de fluorescência.

Além disso, existem dois tipos de imunofluorescência; imunofluorescência direta e indireta. A diferença entre a imunofluorescência direta e indireta reside principalmente no número de anticorpos utilizados e na conjugação de fluoróforo. Ou seja, na imunofluorescência direta, o fluoróforo se conjuga diretamente ao anticorpo primário, enquanto na imunofluorescência indireta, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo secundário.

CONTEÚDO

1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é Imunofluorescência Direta
3. O que é Imunofluorescência Indireta
4. Semelhanças entre imunofluorescência direta e indireta
5. Comparação lado a lado - Imunofluorescência direta versus indireta em forma de tabela
6. Resumo

O que é imunofluorescência direta?

A imunofluorescência utiliza anticorpos para detectar antígenos alvo específicos. A imunofluorescência direta é um dos dois tipos de imunofluorescência. Na imunofluorescência direta, um único anticorpo (anticorpo primário) envolve e o fluoróforo se conjuga diretamente com o anticorpo primário. Após a ligação do anticorpo ao antígeno alvo, o fluoróforo emite fluorescência que pode ser detectada por um microscópio de fluorescência.

Figura 01: Imunofluorescência direta

No entanto, a imunofluorescência direta é um método caro, uma vez que os anticorpos conjugados primários são caros em comparação aos anticorpos secundários. No entanto, não envolve uma etapa adicional, portanto, uma técnica mais curta. Além disso, ligações não específicas são reduzidas na imunofluorescência direta. Portanto, a reatividade cruzada das espécies é baixa. Mas na detecção, a sensibilidade da imunofluorescência direta é fraca em comparação com a imunofluorescência indireta .

O que é imunofluorescência indireta?

A imunofluorescência indireta é o segundo tipo de imunofluorescência que envolve dois tipos de anticorpos, como anticorpos primários e secundários, na marcação do antígeno alvo. Neste método, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo secundário. Portanto, essa técnica envolve uma etapa adicional.

Figura 02: Imunofluorescência

No entanto, a sensibilidade é alta nesse método, pois vários fluoróforos podem ser conjugados com anticorpos secundários e facilita a detecção. Além disso, a imunofluorescência indireta é menos cara devido ao fato de a conjugação de anticorpos secundários ser menos cara e mais fácil. Em comparação com a imunofluorescência direta, a reatividade cruzada das espécies é alta no método indireto.

Quais são as semelhanças entre imunofluorescência direta e indireta?

• São dois tipos de técnica de imunofluorescência.
• Anticorpos primários e fluoróforo envolvem ambos os métodos.
• Além disso, a reação antígeno-anticorpo ocorre nos dois métodos.
• Além disso, a imunofluorescência direta e indireta utiliza um microscópio de fluorescência para a detecção de antígenos.

Qual é a diferença entre imunofluorescência direta e indireta?

A imunofluorescência pode ser direta ou indireta com base na conjugação de fluoróforo com os anticorpos utilizados. Na imunofluorescência direta, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo primário, que é o anticorpo único que envolve essa técnica. Em contraste com isso, na imunofluorescência indireta, o fluoróforo se conjuga com o anticorpo secundário, que é um dos dois tipos de anticorpos envolvidos na técnica. Portanto, a principal diferença entre imunofluorescência direta e indireta é o tipo de anticorpo que se conjuga com o fluoróforo.

O infográfico a seguir fornece uma comparação lado a lado da diferença entre imunofluorescência direta e indireta.

Resumo - Imunofluorescência direta versus indireta

A imunofluorescência é uma técnica usada para detectar a presença de antígenos específicos em uma amostra. Esta técnica usa anticorpos específicos. Portanto, nisto, os anticorpos se conjugam com fluoróforos para detectá-los usando um microscópio fluorescente. Além disso, existem dois tipos de imunofluorescência, a saber, imunofluorescência direta e indireta. A imunofluorescência direta envolve um único anticorpo e fluoróforo diretamente conjugado a esse anticorpo. A imunofluorescência indireta envolve dois anticorpos; primário e secundário e fluoróforo conjugado com o anticorpo secundário. Como vários anticorpos secundários podem se ligar a um anticorpo primário e vários fluoróforos podem se conjugar com anticorpos secundários, a imunofluorescência indireta é um método mais sensível que o método direto. Além disso, o método indireto é mais barato que o método direto. Assim, essa é a diferença entre imunofluorescência direta e indireta.

Referência:

1. "Imunofluorescência". Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 de agosto de 2018. Disponível aqui 

Cortesia da imagem:

1. "HSP IF IgA" Por Emmanuelm em en.wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. ”Immunofluorescence” Por Westhayl618 - Trabalho próprio, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia