Diferença entre ligação sem corte e pegajosa

Diferença-chave - Ligação Blunt vs Sticky End
 

Endonucleases de restrição são enzimas específicas que cortam o DNA de fita dupla (dsDNA). Eles também são conhecidos como tesouras moleculares na biologia molecular. As enzimas de restrição são capazes de reconhecer seqüências curtas específicas do dsDNA conhecidas como locais de reconhecimento e clivam as ligações fosfodiéster e hidrogênio para abrir filamentos duplos. Como resultado da clivagem dessas enzimas, os fragmentos de DNA são produzidos com diferentes tipos de extremidades, como extremidades adesivas e extremidades cegas. A DNA ligase é uma enzima usada na biologia molecular para unir duas cadeias adjacentes de DNA, formando novas ligações. O passo é conhecido como ligação e, de acordo com o tipo de extremidade do DNA ligado, eles podem ser chamados de ligação final cega e ligação pegajosa. A principal diferença entre as ligaduras sem corte e pegajosa é que ocorre uma ligação final entre fragmentos de DNA que contêm duas extremidades enquanto que a ligação final pegajosa ocorre entre saliências de 5 'e 3'. Comparado à ligadura final sem corte, a ligadura final pegajosa é mais eficiente e estável.

CONTEÚDO
1. Visão geral e principais diferenças
2. O que é uma Luta Final Sem Corte
3. O que é uma ligação final pegajosa
4. Comparação lado a lado - Ligação final sem corte versus pegajosa
5. Resumo

O que é uma ligação final sem corte?

Algumas endonucleases de restrição podem cortar o DNA nas bases opostas e produzir fragmentos de DNA finais cegos. Essas enzimas são conhecidas como cortadores de ponta cega; eles partem direto para o meio do local da restrição, sem deixar bases pendentes únicas. Extremidades contundentes também são conhecidas como extremidades não suspensas, uma vez que não possuem bases suspensas de 3 'e 5' nas extremidades. Ambos os fios terminam a partir de pares de bases em extremidades sem corte. As enzimas comuns de corte final são EcoRV HaeIII, AluI e SmaI.

A ligadura do ponto cego está envolvida entre dois pontos cegos. Não é uma ligadura de bases salientes. Essa ligação é menos eficiente que a ligação final pegajosa. No entanto, em algumas ocasiões, a ligação final sem corte se torna mais vantajosa do que a ligação final pegajosa, especialmente ao ligar produtos de PCR. Os produtos de PCR são sempre produzidos com extremidades sem corte. A ligadura da extremidade cega não requer extremidades complementares no DNA para a ligação.

Figura 01: Produção final sem corte pela enzima Eco RV

O que é uma ligação final pegajosa?

Algumas endonucleases de restrição são capazes de cortar dsDNA, deixando um pedaço pendente de DNA de fita simples no final. Essas extremidades são conhecidas como extremidades adesivas ou salientes. A ligação da extremidade pegajosa ocorre entre dois fragmentos de DNA que contêm saliências correspondentes porque as extremidades pegajosas são possuídas com bases não emparelhadas e requerem bases complementares para formar ligações. Portanto, é necessário usar a mesma enzima de restrição para ambas as fontes de DNA para produzir os fragmentos de ligação correspondentes.

A ligação final pegajosa é mais eficiente e muitas vezes é altamente desejável nos processos de clonagem. Existem várias enzimas de restrição que produzem extremidades pegajosas. Eles são EcoRI, BamHI, HindIII etc.

Figura 02: Produção final pegajosa pela enzima Eco RI

Qual é a diferença entre Blunt e Sticky End Ligation?

Blunt vs Sticky End Ligation
Ocorre ligadura final entre dois fragmentos de DNA.	Ligação final pegajosa ocorre entre dois fragmentos de DNA correspondentes com extremidades pegajosas.
Enzimas
Os cortadores de ponta cega produzem pontas cegas.	Cortadores pegajosos produzem pontas pegajosas ou coesas.
Exigência de fins correspondentes
Não requer fragmentos correspondentes ou bases complementares.	Requer bases complementares nas extremidades para formar pares de bases.
Eficiência
É menos eficiente que a ligação final pegajosa	É mais eficiente que a ligação final sem corte.

Resumo - Ligação Blunt vs Sticky End

As endonucleases de restrição são capazes de clivar o dsDNA e produzir fragmentos de DNA com diferentes fins. Eles reconhecem sequências específicas e restringem o DNA, criando extremidades pegajosas e contundentes. Extremidades pegajosas têm bases não emparelhadas no final dos fragmentos. As extremidades sem corte são criadas devido a uma clivagem reta e possuem pares de bases nas extremidades. A ligação final pegajosa requer duas peças complementares de DNA de fita simples. A ligação da extremidade cega ocorre entre dois fragmentos da extremidade cega. Esta é a diferença entre ligadura brusca e pegajosa.

Referências:
1. Roberts, Richard J. "Como as enzimas de restrição se tornaram os cavalos de trabalho da biologia molecular". Anais da Academia Nacional de Ciências. National Acad Sciences, n.d. Rede. 12 Abr. 2017
2. Adnan, Amna. Usos de enzimas de restrição em biotecnologia. N.p., n.d. Rede. 12 Abr. 2017

Cortesia da imagem:
1. “EcoRV Restriction Site.rsh” Por Ramin Herati - Criado com o Inkscape (domínio público) via Commons Wikimedia
2. “Restriction enzima Eco RI” Por Tinastella - Trabalho próprio (Domínio Público) via Commons Wikimedia